Kuidas teha analüüsi PCR-iga: protseduuri kirjeldus

Farüngiit

Polümeraasi ahelreaktsiooni on teada 30 aastat. Seda kasutatakse laialdaselt paljudes valdkondades, alates arheoloogiast kuni geneetikani.

Isaduse kindlakstegemist aitab PCR-meetod, kuid kõige sagedamini kasutatakse seda mitmesuguste nakkushaiguste tuvastamiseks inimkehas.

Kuidas teostatakse PCR analüüs ja mis see on? Me püüame neile küsimustele üksikasjalikult vastata.

PCR analüüs - mis see on?

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on suure täpsusega meetod molekulaarse geneetilise diagnoosimise jaoks, mis võimaldab tuvastada erinevaid nakkuslikke ja pärilikke haigusi nii akuutsetes kui kroonilistes staadiumites ning kaua enne haiguse ilmnemist.

PCR-meetod on absoluutselt spetsiifiline ja teostatud õigesti, ei saa anda valepositiivset tulemust. See tähendab, et kui nakatumist ei esine, ei näita analüüs kunagi seda, mis see on. Seetõttu on diagnoosi kinnitamiseks praegu väga tihti täiendav PCR-analüüs, et määrata põhjuslik aine ja selle laad.

Polüeraasi ahelreaktsioon (PCR) 1983. aastal, välja töötanud Carey Mulllis (USA), kellele 1993. aastal anti talle keemia Nobeli preemia.

Mis on selle meetodi eelis?

Selle meetodiga tehtav diagnoos võimaldab patogeeni otsida otse uuritavatest materjalidest pärinevas geenis. See on kõige täpsem suguelundite infektsioonide, varjatud infektsioonide, erinevate sugulisel teel levivate haiguste analüüs.

Erinevused PCR-i diagnostikast muudest laboriuuringute meetoditest on järgmised:

  • selle meetodi eesmärk on tuvastada patogeen ise;
  • PCR-diagnoos on universaalne: mitme patogeeni avastamiseks;
  • haiguste puhul piisab ainult ühest patsiendi bioloogilisest proovist;
  • meetod on väga tundlik ja sellega ei kaasne muid ristreaktsioone.

Lisaks on PCR-i diagnostika eeliseks see, et patsiendi mis tahes bioloogiline materjal sobib analüüsiks: veri, genitaalidest vabastamine, uriin, sperma.

Millised nakkused võivad ilmneda PCR-il?

Kehas võib esineda suur hulk patogeene, sealhulgas „varjatud”, mis ei avaldu pikka aega.

PCR-i analüüs määrab kindlaks sellised infektsioonid:

PCR-i testitav materjal on tavaliselt röga, sülg, uriin ja veri. Enne analüüsi, peate seda hoolikalt ette valmistama, olles eelnevalt konsulteerinud arstiga.

PCR-i verd manustatakse tavaliselt tühja kõhuga. Hea tulemus näitab analüüsi, kui uuringu materjal on võetud emakakaela kanalist või kusiti. Sellisel juhul on kõige parem teostada PCR-diagnostikat hiljemalt üks päev pärast vahekorda.

PCR sordid

PCR-i kasutatakse paljudes valdkondades analüüsimiseks ja teaduslikes katsetes. On erinevaid analüüsimeetodeid:

  1. RNA-raamatukogust tuntud järjestuse amplifitseerimiseks, eraldamiseks või identifitseerimiseks kasutatakse pöördtranskriptsiooni PCR-i (pöördtranskriptsiooni PCR, RT-PCR (inglise keeles)).
  2. Inverteeritud PCR (inversne PCR (Eng.)) - kasutatakse, kui soovitud järjestuses on teada ainult väike osa. See meetod on eriti kasulik juhul, kui on vaja määrata DNA järjestuse sisestamise järel külgnevad järjestused.
  3. Reaktsiooni kõrvalproduktide arvu vähendamiseks kasutatakse pesastatud PCR-i (nested PCR). Kasutatakse kahte paari praimereid ja viiakse läbi kaks järjestikust reaktsiooni.
  4. Asümmeetriline PCR (asümmeetriline PCR) viiakse läbi, kui on vaja võimendada peamiselt algse DNA ahelaid. Kasutatakse mõnedes sekveneerimis- ja hübridisatsioonitestides.
  5. Kvantitatiivne PCR (kvantitatiivne PCR, Q-PCR (Eng.)) Või reaalaja PCR-i abil kontrollitakse otseselt konkreetse PCR-produkti koguse mõõtmist igas reaktsioonitsüklis.
  6. Etapp PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - kasutades seda lähenemist, vähendab mittespetsiifilise praimerite seondumise mõju.
  7. Gruppide spetsiifiline PCR (rühma-spetsiifiline PCR) - PCR seotud järjestuste jaoks ühes või erinevate liikide vahel, kasutades nende järjestuste jaoks konservatiivseid praimereid.

Kui maatriksi nukleotiidjärjestus on osaliselt või tundmatu, on võimalik kasutada degenereerunud praimereid, mille järjestus sisaldab degenereerunud positsioone, kus võib paikneda mis tahes alused. Näiteks võib praimerijärjestus olla:... ATH..., kus H on A, T või C.

Milliseid bioloogilisi materjale uuritakse?

PCR-uuringute materjal, milles võib tuvastada võõraste bakterite DNA-d või viiruse DNA või RNA, võib koosneda erinevatest bioloogilistest keskkondadest ja inimese vedelikest:

  1. Uriin. Seda võib kasutada urogenitaaltrakti nakatamiseks meestel ja uriiniorganites naistel (meestel uriini kasutamine materjalina asendab epiteeli kraapimist).
  2. Flegma. Seda kasutatakse tuberkuloosi diagnoosimiseks ja harvemini klamüüdia ja mükoplasmoosi hingamisteede diagnoosimiseks. Röga koguses 15-20 ml kogutakse steriilsesse (ühekordselt kasutatavasse) pudelisse.
  3. Bioloogilised vedelikud. Eesnäärme mahl, pleura, tserebrospinaalne, amnion, liigeste vedelik, bronhokalveolaarne loputus, sülg võetakse vastavalt näidustusele.
  4. Limaskestade epiteelijäägid. Tavaliselt kasutatakse sugulisel teel levivate haiguste, näiteks gonorröa, klamüüdia, mükoplasmoosi, ureaplasmoosi, trihhomonoosi, gardnerelleesi, herpese ja teiste limaskestasid mõjutavate infektsioonide diagnoosimiseks.
  5. Biopsiad. Kõige sagedamini kasutatavad kõhu- ja kaksteistsõrmiksoole biopsiad Helicobacter pylori nakkuse tuvastamiseks.
  6. Veri, plasma, seerum. Kasutatakse hepatiit B, C, D, G viiruste, herpes, CMV, HIV, inimese geenide PCR analüüsis.

Kuidas analüüsiks valmistuda?

PCR-i tulemuse usaldusväärsus sõltub otseselt materjali kontrollimise õigsusest. Materjal ei tohi olla saastunud, vastasel juhul ei ole uuringu tulemus objektiivne. Kõige olulisemad soovitused enne PCR-analüüsi esitamist on järgmised nõuded:

  1. Uriini manustatakse hommikul steriilses mahutis.
  2. Hommikul tuleb tühja kõhuga võtta nakatumise vereanalüüs.
  3. Analüüsile eelneval päeval ei ole vaja näidata seksuaalset aktiivsust.

Analüüsi tulemus on valmis 1,5-2 päeva pärast protseduuri. On selliseid olukordi, kus tulemust saab valmistada samal päeval.

CRP analüüsi dekodeerimine

Esitatud uuringute tõlgendamise protsess eristub selle lihtsusest. PCR-analüüsi tulemused on võimalik saada 1,5-2x päeva pärast materjali kohaletoimetamist. Mõnel juhul on tulemus juba esimesel päeval valmis ja see võib tähendada:

  • Negatiivne tulemus näitab, et diagnoositavast materjalist puudub nakkusohtlik aine.
  • Pcr positiivne tähendab, et patogeeni DNA või RNA esineb inimkehas.

Mõnel juhul saadakse mikroorganismide kvantitatiivne määramine. See kehtib eriti oportunistlike mikroorganismide põhjustatud haiguste kohta. Kuna need bakterid avaldavad negatiivset mõju ainult liigse koguse korral.

Samuti on PCR kvantitatiivne analüüs oluline terapeutilise taktika valikul ja viirusinfektsioonide, nagu HIV ja hepatiidi viiruste raviks.

Kui täpne on nakkuste PCR-diagnoos?

PCR meetodit iseloomustab kõrge täpsus, spetsiifilisus ja tundlikkus. See tähendab, et see analüüs võimaldab:

  • täpselt kindlaks teha nakkuse olemasolu või puudumine;
  • täpsustage täpselt, milline infektsioon (spetsiifilisus)
  • avastada bioloogilise materjali mikroobide väga väikese DNA sisaldusega nakkust, t
  • mida on uuritud (tundlikkus).

PCR analüüs: hind ja aeg

Konkreetse analüüsi hind sõltub sellest, millist nakkust kontrollitakse. Ligikaudsed hinnad ja tingimused:

  1. STI: 300-500 rubla, aeg - 1 päev;
  2. Epstein-Barri viirus, inimese papilloomiviirus, herpesviirus, tsütomegaloviirus: 300-500 rubla, terminid - 1 päev;
  3. Hepatiit A, B, C, D, G: 650 rubla kvalitatiivne analüüs, 2000 rubla kvantitatiivne analüüs. Tingimused - kuni 5 päeva;
  4. C-hepatiidi viiruse antikehad kokku (anti-HCV) - 420 rubla;
  5. C-hepatiidi viiruse antikehad, IgM (anti-HCV IgM) - 420 rubla;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rubla, tingimused - 1 päev;
  7. HIV (antikehad ja antigeenid) - 380 rubla;
  8. HIV RNA, kvalitatiivselt - 3500 rubla;
  9. HIV RNA, kvantitatiivselt - 11 000 rubla.

Raha säästmiseks saate valida kindla analüüsipartii. Seda teenust pakub enamik kliinikuid, kus on võimalik analüüs läbi viia ERP meetodil (invitro, onclinics jne).

Tuberkuloosi PCR-diagnoos

Tuberkuloos on spetsiifiline nakkus, selle fookus võib olla inimkudedes juba aastaid ja seejärel mitme kuu jooksul. See on krooniline haigus, mille optimaalne ravirežiim on raske valida. Selle üheks põhjuseks on hiline diagnoosimine, kui mükobakterid on inimorganismis juba paljude ravimitega kohanenud.

Millised on kaasaegsed diagnoosimeetodid? PCR diagnostika - mis see on? Kuidas see uurimus tehakse? Millistel juhtudel on selle meetodiga diagnoositud tuberkuloos ja milline on selle olemus?

Mis on PCR diagnostika

See on üks kaasaegsemaid meetodeid mitte ainult haiguste, vaid ka bioloogilise materjali avastamiseks. PCR diagnostika leiutati suhteliselt hiljuti. Umbes 30 aastat tagasi 1983. aastal pakkus Ameerika biokeemik Carey Banks Mullis välja ühe lühikese segmendi mikroorganismide bioloogilise materjali kompleksse taastamiskava. Tänu avastusele pälvis teadlane kõrgeima auhinna - Nobeli preemia.

Mis see on - nakkuste PCR-diagnoos? Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on viirushaiguste avastamise diagnoos, mis põhineb geenitehnoloogia meetoditel. Seda kasutatakse laialdaselt meditsiinilise mikrobioloogia, immunoloogia ja viroloogia valdkonnas. Meetod on universaalne ja aitab teha diagnoosi väikese koguse materjaliga. Infektsiooni võib sõna otseses mõttes tuvastada esimestel nakatumise tundidel kaua enne haiguse esimeste sümptomite ilmnemist.

Meetod seisneb haige inimeselt materjali saamises mitte patogeenis, vaid genoomi fragmentides (DNA osakesed), selle biosünteesis ja sellele järgneva määramisega, milline mikroorganismide klass on saadud geneetilise materjali molekulide geneetiliste meetodite abil.

Hoolimata asjaolust, et see on keeruline protsess, kulub palju vähem aega kui paljud bioloogilised meetodid nakkusetekitajate avastamiseks. Mõne tunni jooksul võib mikroorganismi PCR abil tuvastada. Selleks ei ole vaja seda keskkonnast eraldada (veri, tserebrospinaalvedelik, röga) ja kasvatada seda pikka aega kunstlikel toitainetel. Piisab, et uuritava materjali juures on nakkusetekitaja DNA ahela väike fragment.

Reaktsiooni aluseks on kunstlikes tingimustes (in vitro) võimalus nakkusetekitaja nukleiinhappemolekulide sünteesi loomiseks.

Mida on vaja PCRi jaoks?

  1. Krundid on DNA segmendid, millest algab biosüntees või loomine.
  2. Nukleotiidid või komplekssed ühendid, mis on DNA või RNA molekuli aluseks.
  3. Polümeraasi ahelreaktsioon on polümeraasi olemasolu korral võimatu, mis on PCR-i kiirendav ensüüm.

PCR-diagnostika etapid

Kuidas toimub molekulaarne diagnoos PCR abil? Menetlus on lihtne ja võtab aega, võttes arvesse materjali kogumist.

  1. Enne uuringu alustamist võtavad nad vajaliku bioloogilise materjali - see on bronhide pesuvesi, veri, mao sisu, röga. Bioloogilise materjali tüüp sõltub kahtlustatavatest patogeenidest.
  2. Kahest ahelast koosneva DNA esmase struktuuri denaturatsioon või hävimine. Selle etapi põhieesmärk on eraldada kaks ahelat kõrge temperatuuri mõjul (maksimum on 98 ° C, mis kestab mitte rohkem kui kaks minutit).
  3. PCR järgmises etapis, mida nimetatakse anniilimiseks, vähendatakse temperatuuri mitu kraadi, nii et praimer seondub DNA ahelaga.
  4. Pikenemine, mille jooksul toimub soovitud molekulide süntees otse.

Selle tulemusena saavad ainult 25–30 sellist tsüklit vajaliku arvu koopiaid mikroorganismi DNA-st, mida on lihtne ära tunda.

Kas PCR nõuab tuberkuloosi diagnoosi?

PCR-i ei ole võimalik teostada absoluutselt kõikidel inimestel, kellel on kahtlustatav tuberkuloos, kuna see meetod nõuab kalleid seadmeid. Mitte kõik avalikud kliinikud ei saa seda endale lubada. Lisaks juhtus nii, et tavalised meetodid nakkuse diagnoosimiseks enamikul juhtudel õigustavad ka ennast.

Nende hulka kuuluvad:

  • patsiendiuuring, ajaloo võtmine;
  • isiku täielik läbivaatus;
  • Mantoux tuberkuliiniproovi kasutades;
  • radiograafia või fluorograafia;
  • vajadusel arvuti diagnostika;
  • mikrobioloogiliste uuringute meetodid: mustri mikroskoopia ja röga bakterioloogiline uurimine.

Tuberkuloosi PCR viiakse läbi erijuhtudel, kui on raske diagnoosida või muid instrumentaalseid meetodeid ei ole võimalik teostada.

Vaatamata diagnostiliste meetodite rohkusele kasvab tuberkuloosi esinemissagedus jätkuvalt. Praegu ei ole mitte ainult kasv, vaid ka muud omadused:

  • haigus esineb sageli raskes vormis;
  • surmaga lõppenud juhtude arv suureneb;
  • haiguse diagnoositud vormid on üha resistentsemad tänapäevase keemiaravi suhtes.

Inimeste vastumeelsus igal aastal läbi viia tavapäraseid arstlikke läbivaatusi, vaktsineerimise tagasilükkamine viib tuberkuloosi levikuni. Sellistes tingimustes on vaja kiireid, informatiivseid ja tõhusaid uurimismeetodeid, mis peaksid olema kättesaadavad lastele ja täiskasvanutele. Kõik ülaltoodud diagnostikameetodid on palju halvemad kui PCR.

Tuberkuloosi diagnoosimise eelised PCR-iga

See uuring, kuigi uus, on end hästi tõestanud, eriti vastuolulistel juhtudel, kus on mitmel põhjusel võimatu diagnoosida.

Tänu PCR-ile on katsematerjalis tuberkuloosi põhjustaja tuvastamine palju lihtsam.

PCR-i diagnostika eelised on järgmised.

  1. See on kiire analüüs. DNA molekuli väikest fragmenti saab kasutada vaid mõne tunni (umbes viie) tunni jooksul diagnoosimiseks, mida kasutatakse hädaolukordades edukalt, kui näiteks enne operatsiooni on vaja kindlaks teha, kas inimene on haigestunud tuberkuloosiga.
  2. PCR-analüüs on lubatud juhul, kui teised meetodid ei ole kättesaadavad või keelatud (kopsu tuberkuloosi avastamiseks tuleb mõnikord võtta mitu radiograafilist pilti, mis on suur kiirgusdoos).
  3. PCR abil uuritakse mistahes bioloogilist keskkonda patogeeni olemasolu selles. Näiteks võite teha uuringuid tserebrospinaalvedeliku kohta, kui kahtlustatakse tuberkuloosse meningiidi tekkimist.
  4. Laste nakkushaiguste lubatud PCR-diagnoos, sest meetod on ohutu.
  5. Võimaldab tuvastada patogeeni haiguse mis tahes staadiumis.
  6. PCR kõrge tundlikkus võimaldab tuvastada Mycobacterium tuberculosis, isegi kui bioloogilises materjalis on vaid mõned mikroorganismid.
  7. Haiguse kordumise diagnoosimiseks on hea teha.

Lõppude lõpuks tundub lugenud PCR peaaegu täiuslik diagnostiline meetod, mis peaks tegema kõikidele tuberkuloosi kahtluse. Kuid siin on ka puudusi, neid tuleb arvesse võtta.

PCRi puudused tuberkuloosi diagnoosimisel

Meie aja jooksul on selline diagnostika tavalisest harvem. Ja selleks on põhjus.

  1. See on kallis uurimismeetod. Paljudes kliinikutes puuduvad PCR-i seadmed selle kõrge maksumuse tõttu, kuid analüüse saab veel teha tasulistes laborites.
  2. Vahetult pärast töötlemist võivad inimkehas olla surnud mükobakterid või väikeses koguses elamine (tulemus on positiivne PCR-diagnostika ajal), mistõttu meetod ei ole sel ajal usaldusväärne, seda ei ole mõistlik seda teha.
  3. Mükobakterite mutatsioonid põhjustavad ebaefektiivset PCR-i - normaalset DNA ahela järjestust ei ole võimalik sünteesida.
  4. Uuringu jaoks on vaja valida õige keskkond, verd võetakse ainult siis, kui kahtlustatakse nakatumist (sepsis), närvisüsteemi organite tuberkuloosi korral ei ole vaja rögaid võtta. Sellisel juhul ei suuda PCR patogeeni tuvastada ja diagnoos on informatiivne.

Indikaatorid tuberkuloosi tuvastamiseks PCR analüüsi abil

Tuberkuloosi PCR-diagnoosimine toimub kõige sagedamini vastuolulistel juhtudel. Millal suunavad arstid selle uuringu?

  1. Kui diagnoosi on raske teha tavapäraste olemasolevate meetodite abil, kuid tuberkuloosiga patsiendil oli kokkupuude.
  2. Juhul, kui isikut ei saa kliinikusse tuberkuloosi rutiinsete katsete tegemiseks üle anda, on teda kergem uurida PCR-i abil, sest testi röga võib toimuda purki ja diagnoos kinnitatakse mõne tunni jooksul.
  3. Kui inimesel on hädaabioperatsioon ja on hädavajalik teada saada, kas ta on haigestunud tuberkuloosiga.
  4. Vajadusel on rasedatel ka PCR-i abil paremini uurida tuberkuloosi, sest meetod on ohutu.
  5. Tasulisel alusel on igaüks, kellel ei ole diagnoositud tuberkuloosi, kinnitatud bakterioloogiliste meetodite ja fluoroskoopia abil. See juhtub siis, kui kopsudes esinev kahjustus ei ole otseses pildis nähtav ning uuringu jaoks röga väljaandmisel ei suutnud inimene järgida materjali õige kogumise soovitusi. Sel juhul on inimene mures kõikide kopsutuberkuloosile iseloomulike sümptomite pärast.
  6. Kui on kahtlusi Mantoux'i testi tulemuste suhtes.
  7. Lastel on soovitatav teha tuberkuloosi PCR-diagnoos. Protseduur on ohutu, ei tekita täiendavat kiirgusega kokkupuutumist ja on efektiivne haiguse diagnoosimiseks raske.

Tuberkuloosi õigeaegne diagnoosimine on võtmeks nõuetekohaselt määratud ravile ja haiguse leviku vähendamisele. Sageli ei ole tuttavad haiguse tuvastamise meetodid alati tõhusad. Seetõttu on PCR tänapäeval üks kõige usaldusväärsemaid ja ohutumaid viise nakkuse avastamiseks selle arengu varases staadiumis.

PCR analüüs

PCR (polümeraasi ahelreaktsioon) on kõige kiirem ja kõige usaldusväärsem meetod nakkushaiguste diagnoosimiseks.

Polüeraasi ahelreaktsiooni meetodi põhimõte töötati välja Kary Mullis poolt 1983. aastal. Tema avastamiseks sai K. Mullis 1993. aastal Nobeli keemia auhinna.

PCR meetod võimaldab teatud nukleiinhappe fragmentide (DNA) väikeste kontsentratsioonide olulist suurenemist bioloogilises materjalis (proovis). Meetod põhineb teatava DNA osa mitmekordsel selektiivsel kopeerimisel (amplifitseerimisel), kasutades ensüüme kunstlikes tingimustes.

PCR-i diagnostilise meetodi eelised nakkushaiguste diagnostiliseks meetodiks

Patogeenide otsene avastamine

Paljud traditsioonilised diagnostikameetodid, nagu ensüümi immunoanalüüs, tuvastavad nakkusetekitajate elutähtsate aktiivsustena leiduvaid valgu markereid, mis annab ainult kaudseid tõendeid nakkuse esinemise kohta. Patogeeni spetsiifilise DNA piirkonna tuvastamine PCR meetodil annab otsese viite patogeeni olemasolu kohta.

Kõrge spetsiifilisus

PCR meetodi kõrge spetsiifilisus on tingitud asjaolust, et uuritavast materjalist tuvastatakse ainulaadne DNA fragment. Spetsiifilisust määrab praimerite nukleotiidjärjestus, mis välistab valede tulemuste saamise võimaluse, erinevalt immunoloogilistest analüüsimeetoditest, kus ristsiduvate antigeenidega seotud vead on sagedased.

Suur tundlikkus

PCR meetod võimaldab tuvastada isegi üksikuid bakterite või viiruste rakke. PCR analüüs näitab nakkushaiguste patogeenide esinemist juhtudel, kui teised meetodid (immunoloogilised, bakterioloogilised, mikroskoopilised) ei suuda seda teha. PCR analüüsi tundlikkus on 10-100 rakku proovi kohta (immunoloogiliste ja mikroskoopiliste testide tundlikkus on 103-105 rakku).

Erinevate patogeenide avastamise menetluse universaalsus

Uuringu materjal PCR abil on patogeeni DNA. Meetod põhineb konkreetse organismi suhtes spetsiifilise DNA fragmendi või RNA avastamisel. Kõigi nukleiinhapete keemilise koostise sarnasus võimaldab kasutada ühtseid laboriuuringute meetodeid. See võimaldab diagnoosida mitut patogeeni ühest biotestist.

Kõrge analüüsitulemus

PCR analüüsi jaoks ei ole vaja patogeeni kultuuri eraldamist ja kultiveerimist, mis võtab palju aega. Ühendatud meetod biomaterjali töötlemiseks ja reaktsioonisaaduste tuvastamiseks ning amplifitseerimisprotsessi automatiseerimiseks võimaldavad teostada täielikku analüüsi 4-5 tunni jooksul.

Võime diagnoosida mitte ainult ägedaid, vaid ka varjatud infektsioone

PCR meetod on eriti efektiivne raskesti kultiveeritavate, kultiveerimata ja püsivate mikroorganismide vormide diagnoosimiseks, mis sageli esinevad latentsetes ja kroonilistes infektsioonides, kuna see meetod väldib selliste mikroorganismide kasvatamisega seotud raskusi laboris. PCR diagnostika kasutamine on samuti väga tõhus kõrge antigeense varieeruvuse ja rakusiseste parasiitide patogeenide vastu.

Kui tõhus on tuberkuloosi röga testimine PCR abil?

Koch-pulgade identifitseerimiseks inimestel kasutatakse erinevaid diagnostilisi meetodeid. Tänu temale võib patoloogiat avastada isegi algstaadiumis, mis suurendab patsiendi taastumise võimalusi. Tuberkuloosi röga analüüs on tehnika, mida hinnatakse kõige paremini ja on üsna tõhus. Mis see on ja kui palju see hind läheb?

Mis on röga analüüs PCR-iga?

PCR tähistab polümeraasi ahelreaktsiooni. See meetod on tõhus nakkushaiguste vastu. Selge diagnoosi kindlakstegemiseks ei pea te koguma suurt hulka biomaterjale ja ootama pikka aega, nagu röga külvamise puhul.

Meetod põhineb mikroorganismiosakeste DNA saamisel. Lisaks määrab molekulaarne geneetiline uurimine, millised mikroorganismid peaksid sisaldama kättesaadavat materjali. Katseklaasi tingimustes sünteesib spetsialist bakterimolekulid ja teeb asjakohased järeldused mõne tunni pärast.

Tõhusus

Mycobacterium tuberculosis'e röga analüüs on efektiivne, kui Kochi võlukepp on tabanud hingamisteid. Sel juhul saab haigust kergesti tuvastada isegi nakatamise esimestel tundidel.

Kuid röga analüüs ei näita usaldusväärset tulemust, kui tuberkuloos on olemas:

  • luud;
  • aju, seljaaju;
  • närvisüsteem;
  • liigesed jne

Ftisiatroloog suudab määrata haiguse tüübi, võttes arvesse praeguseid sümptomeid ja tuginedes üldiste ja muude analüüside tulemustele.

Sellise uurimismeetodi puhul ei sobi ka juhul, kui peate pärast haiguse terapeutilist ravi läbi viima kontrollanalüüsi. Tulemus on positiivne, nagu kehas, igal juhul on veel elav või surnud IBC. Parem on eelistada teist diagnostilist protseduuri.

Meetodi vastunäidustused

Seega ei ole tuberkuloosi röga testimiseks vastunäidustusi, kasutades PCR-i. On piiranguid. Nagu eespool mainitud, ei ole seda vaja pärast tuberkuloosi ravi läbi viia. Tulemused ei ole kasulikud. Siin on soovitav kasutada erinevat diagnoosi.

Lisaks ei ole selle diagnoosi jaoks muid takistusi. Röga võib uurida igas vanuserühmas ja sellega seotud haiguste korral. Isegi kui röga vabanemist ei toimu, võib analüüsi teha lima kasutades bronhoskoopiat.

Kasu

Selles meetodis on plusside mass need:

  1. Suur spetsiifilisus ja tundlikkus. Avastatakse ainult tuberkuloosi põhjustaja. Kui kõik protseduuri nüansid on arvesse võetud, ei saa olla vale vastust. Mükobaktereid avastatakse isegi siis, kui nende minimaalne arv on. Isegi kui kogutud materjalis on 10 ebanormaalset rakku, avastatakse nakkus.
  2. Vastuse saamise kiirus. Kui palju analüüsi tehakse? 3-5 tunni pärast saad tulemuse. Tuberkuloosi jaoks ei ole vaja teha röga kultuuri, mis vähendab aega.
  3. Saate tuvastada peidetud nakkuse ja akuutse vormi.
  4. Absoluutseid vastunäidustusi pole. See võimaldab protseduuri läbi viia kõikidele eranditult (isegi väikestele lastele) ja eriti juhul, kui teised meetodid on lahendamata.
  5. PCR diagnostika abil uuritakse erinevaid biomaterjale (uriin, väljaheited, veri, sülg, tserebrospinaalvedelik jne).
  6. Meetod näitab tuberkuloosi varases staadiumis, esimestel tundidel pärast nakatumist.
sisu ↑

Puudused

Lisaks positiivsetele külgedele on ka negatiivsed. See on:

  1. PCR-analüüs on kallis „rõõm”. Lisaks ei ole selle rakendamiseks vajalikud seadmed igas meditsiinikeskuses kättesaadavad. Kliinikutes esineb seda harva, sest ka selle väärtus on suur. Kui me räägime erakliinikutest, siis jah, leiad sellist diagnoosi. Luba ennast, kahjuks, ei saa kõik.
  2. See näitab valepositiivset tulemust inimestel, kes on hiljuti läbinud tuberkuloosiravi.
  3. Kui MBC on muteeritud, võib meetod anda ka valeandmeid.
  4. Kui materjal on valesti kogutud või kui uurimist teostav spetsialist on ebapiisava kvalifikatsioonitasemega, on võimalik ka talitlushäire. Mõnel juhul tuleb protseduuri korrata mitu korda ja iga kord, kui makse korratakse.
sisu ↑

Analüüsi ettevalmistamine

Selleks, et materjal oleks kvaliteetne, peab see olema korrektselt kokku pandud ja selleks korralikult ette valmistatud.

Tuberkuloosi röga kogumiseks on teatud reeglid. Toimimisalgoritm on järgmine:

  1. Isegi eelõhtul peab õhtul inimene minema köha (kui röga liigub halvasti). Isegi kui see ei aidanud, tuleb sissehingamine läbi viia ravimite lahjendamise ja väljatõmbumise alusel. Röga puudumisel on patsient suunatud bronhoskoopiale. Selle menetluse käigus tehakse uuringu materjal.
  2. Ostu eelnevalt spetsiaalne konteiner. See on steriilne ja õhukindel, nii et seal ei saa midagi täiendavat paigutada ega avada.
  3. Ruum, kus röga kogutakse, peab olema hästi ventileeritud. Akende, uste avamine, kapoti avamine on vajalik. Teine hea võimalus on saada värsket õhku (näiteks rõdule või sisehoovile).
  4. Vahetult enne protseduuri peate kõiki hoiatama, et keegi ei siseneks ruumi, kus kõik juhtub. Biomaterjalis ei tohiks olla täiendavaid mikroosakesi - see on oluline.
  5. Söömine enne korjamist ei ole soovitatav.
  6. Suu ja kurgu loputamine.
  7. Sülg on sülitatud. Selle maht peaks olema minimaalne.
  8. Köhides võtab inimene lima välja ja sülitab selle valmis mahutisse. Pärast protseduuri sulgege kaas tihedalt ja proovi laborisse.

Kuidas röga koguda, rääkige sellest arstile. Kui patsient ei julge seda ise teha, siis tulevad tervishoiutöötajad päästma. Manipuleerimise ajal panid nad spetsiaalse kaitsva maski. Koguda röga on eriruumis, kus võõrastele pole mingit võimalust. Kui patsient ei saa kliinikusse tulla, tuleb spetsialist oma koju ja aitab lima koguda.

Kui bronhoskoopia on tehtud, süstitakse patsiendi hingetoru koos bronhoskoopiga. Tema abiga võetakse materjal.

Usaldusväärsuse huvides on soovitatav analüüs läbi viia kolm korda, nimelt:

  • hommikul tühja kõhuga;
  • pärast esimest korda 4-5 tunni pärast;
  • 24 tundi pärast esimest uuringut ja ka enne sööki.
sisu ↑

Kuidas seda analüüsi tehakse?

Tuberkuloosi röga katse läbimine on ainult osa tööst. Peamine ees. Palju sõltub spetsialisti ettevalmistamisest.

Uuringu kestus on järgmine:

  1. Spetsialist jätkab DNA esmase struktuuri hävitamist (denaturatsioon). Siin on kaks ahelat. Kõrgetel temperatuuridel eraldatakse need.
  2. Järgmisel etapil vähendatakse temperatuuri (lõõmutatakse). See on vajalik DNA ahela ühendamiseks praimeriga.
  3. Kolmas etapp on pikenemine. Siin sünteesitakse vajalikud molekulid.
sisu ↑

Tulemuste dekodeerimine

Mycobacterium tuberculosis'e röga poolt PCR-i abil saab tuvastada või mitte. Positiivne tulemus põhineb asjaolul, et Koch on biomaterjalis DNA-ga. See viitab sellele, et inimene on nakatunud. Negatiivse - 98% asjaolust, et subjekt ei ole nakatunud.

Indikaatoreid saab hinnata järgmiselt:

  • milline patoloogia faas (varjatud või aktiivne);
  • kui palju keha mõjutab;
  • kas valitud ravi on konkreetsel juhul tõhus.

Pea meeles, et midagi pole põhjalik. Seetõttu võib olla valepositiivne või vale-negatiivne tulemus. Selle õigsuse tagamiseks on soovitatav kasutada muid diagnostilisi protseduure või teostada PCR kaks korda (kolm korda).

Kulude analüüs erinevates keskustes

PCR-i röga võib anda erinevatel kliinikutel. Andkem näiteid mitme populaarse Moskva keskuse hinnapoliitikast.

Tuberkuloosi röga testimise meetodid

Tuberkuloosi röga analüüs sisaldub diagnostikameetmete kogumis, mis on vajalik diagnoosi tuvastamiseks ja selgitamiseks. Röga sisaldus aitab luua pädeva raviskeemi.

Kuidas läbida tuberkuloosi röga test

Arstid on välja töötanud reeglid analüüsi tegemiseks. Sülg kogutakse hommikul, enne kui isik on hommikusööki saanud. Esiteks täidab patsient hügieeniprotseduure:

  • hambaemailide puhastamine;
  • põhjalik loputamine suuõõne ja neelu puhta veega.

Seejärel algab analüüsimiseks materjali kohene tarnimine. Kuidas läbida röga test? Menetluse nõuded:

  1. Ettevalmistus algab õhtul ette. Patsienti julgustatakse võtma spetsiaalseid ravimeid, mis muudavad pulmonaalse sekretsiooni loomulikumaks. Need on röstimis- ja harvendusühendid. Kui sellised protseduurid ei aita, teostage inhaleerimine ravimkompositsiooniga, mis on ette nähtud röstimiseks.
  2. Valmistage röga mahutid. Lima tuleb koguda steriliseeritud nõudesse, sulgedes tihedalt, tihedalt.
  3. Enne kohaletoimetamist köha ja sülita mahutisse. Sülje maht ei tohiks olla suur, see nõuab kõri välja röga. Suuõõne bakterid on analüüsis kõrvalised.
  4. Koguda sülg suurepärase ventilatsiooniga ruumis. Analüüs viiakse läbi avausega, avades kapuutsi. Soovitatav on aknad avada või värske õhu kätte minna.

Menetluse ajal on toas keelatud siseneda. Välised isikud võivad kaasa aidata büroo mikrofloorale ja seega röga, patoloogiliste vormide juurde. Meditsiinitöötajad saavad analüüsi spetsiaalse maskiga (respiraator).

Tuberkuloosi transkripti röga analüüs

Dekodeerimine algab lima välimuse vaatamisega. Patoloogia iseloomustab värvimuutust - see muutub tumedaks, nähtavate veresegudega. Värv ei ole peamine näitaja. Pähkel muutub tumedaks punase veini joomist, kohvi kirg. Mõned ravimid ja värvilised joogid muudavad lima välimust.

Kogutud materjali dešifreerib kaks näitajat, st arstid saavad kaks tulemust:

Positiivne vastus

Saadud röga analüüs kinnitab haiguse esinemist organismis. Mis kinnitab seda:

  • võõrkehad või tundmatud lisandid;
  • limaskestade esinemine;
  • nähtavad triibud;
  • ebameeldiv mädane või nakkuslik lõhn;
  • mäda.

Makroskoopiline uurimismeetod pakub muid andmeid:

  • fibriinsed konvulsioonid;
  • Kochi läätsepleki kihid;
  • bakterite lagunemisest tulenevad tooted;
  • kopsukoe patoloogilise protsessi jäänused.

Positiivne tulemus näitab valguühendite suurenenud kogust. See jõuab 100-120 g / l.

Teine mikroskoopiline meetod võimaldab tuvastada teisi ohtlikke elemente:

  • alveolaarsed makrofaagid;
  • leukotsüütide ülehindamine;
  • lümfotsüütide kõrge sisaldus.

Tuberkuloosi puhul püüab inimene sageli suust välja sülitada. Hemoptüüs suurendab punaste vereliblede moodustumist. Sülje maht suus on selline, et inimene ei suuda seda ilma märkamata neelata. See on rohkem kui tervislikus seisundis.

Negatiivne vastus

Uuring näitab, et leukotsüütide arv on väike, vastab normile. Mikrobaktereid ei avastata. Kui patsient ei tunne end tervena, määrab spetsialist täiendava uuringu. On võimalik, et haigus on seotud kopsuhaigusega. Täiendava diagnostika tüübid ja meetodid sõltuvad patsiendi sümptomitest ja seisundist.

Kuidas on lima uuring

Tuberkuloos on kopsukoele ohtlik patoloogiline toime, täheldatakse nende lagunemist. Analüüs viiakse läbi mitme meetodi abil. Kõige tavalisem - ELISA (immunoanalüüs). Meetodi olemus:

  1. Antikehad lisatakse lahusele, kuhu on paigutatud röga osa.
  2. Kontrollige antigeenide kontsentratsiooni võrreldes terve keha normiga.
  3. Määrake patoloogilise keskkonna aktiivsus.
  4. Diagnoosige.

Laboriuuringute teine ​​versioon on JÄÄTMED. Meetodi jaoks võtke spetsiaalne meditsiinitehnika. Riistvara uurimise olemus:

  1. Röga süstitavas mikrokeskkonnas ettenähtud infektsiooni tüübi jaoks.
  2. Seade hakkab kasvama teatud temperatuuri tüvedes.
  3. Protsessis tekib süsinikdioksiid ja andurid võtavad selle vastu.
  4. Gaas ühendab värvi.
  5. Fluorestsentsindeksi kohta tehakse järeldused haiguse tüübi kohta.

Lihtsaim viis on kultuuriline. Flegm külvatakse spetsiaalses keskkonnas. Arst uurib mikroobide moodustumise kolooniate liike. Meetod on pikim, kuid võimaldab teil diagnoosi tõestada. Seda kasutatakse väga harva, just pika aja jooksul, mis ei ole alati patsiendile sobiv.

Tuberkuloosi röga PCR analüüs

PCR on meditsiinilise termini polümeraasi ahelreaktsiooni lühend. Diagnostika on teadlaste üks viimaseid arenguid. See avati 1983. aastal, avastamise tähtsust hinnatakse maailmas, teadlane sai kõrgeima tunnustuse - Nobeli preemia.

Meetod põhineb geenitehnoloogia kasutamisel. Selle mitmekülgsus väikeses koguses materjali täpseks diagnoosimiseks. Tuvastage tuberkuloosi nakatumine on tõesti nakatumise algusaegadel, ilma haiguse tekkimist ootamata.

Polümeraasi meetodi olemus:

  • patsient võtab DNA osakeste fragmenti;
  • teostada materjali bioloogilist sünteesi;
  • määratakse mikroorganismide klassi järgi.

Protsess on tehnoloogiliselt keeruline, see hõlmab molekulaarset geneetilist uurimist. Tuberkuloosi PCR võtab sõna-sõnalt paar tundi. Teiste meetodite jaoks vajalikku aega ei saa temaga kiirelt võrrelda. Pärast analüüsi läbimist ootab patsient haigustekitaja avastamist. Mõista saab ainult spetsialisti aluseks olevat protsessi. Tavaline inimene ei mõista meetodi keerukust.

Kuidas on tuberkuloosi testide diagnoos:

  1. Tehke analüüsiks vajalik materjal. Mis see võiks olla: veri, kõht, röga, vesi, pesta bronhidega.
  2. Materjali tüüp valitakse sõltuvalt patogeeni võimaliku nakkuse tüübist.
  3. Järgmine samm on ahelaühenduse uurimine. Kaks ahelat läbivad kõrge temperatuuri kuni 98 kraadi. Etappi nimetatakse denaturatsiooniks (struktuurse DNA ahela hävitamine). Temperatuuri säriaeg - kuni 2 minutit.
  4. Järgmine etapp on lõõmutamine. Temperatuuri vähendatakse, praimeril lubatakse ühenduda DNA ahelaga.
  5. Selle tulemusena tekib pikenemine - protsessi jaoks vajalike molekulide süntees.

Sellise analüüsi jaoks on vaja spetsiaalset varustust. See on kallis, nii et see ei ole üheski tervishoiuasutuses kättesaadav. PCR viiakse läbi rasketel juhtudel, kui tavapäraste diagnostikameetodite täpset tulemust ei ole, ei ole võimalik läbi viia instrumentaalseid meetodeid patsiendi seisundi kontrollimiseks.

PCR tehnoloogia eelised:

  1. Tulemuse saavutamise kiirus. Umbes 5 tundi on arstil täpsed andmed. See kiirus võimaldab teil patsienti hädaolukorras aidata. Sagedamini on see preoperatiivne periood.
  2. Lubatud, kui teisi meetodeid ei saa kasutada. Näiteks viib röntgenikiirte sagedane kordamine kiirgusele. PCR ei ole patsiendile ohtlik.
  3. Võite uurida mis tahes bioloogilist keskkonda. On tuvastatud isegi keerulised tuberkuloosi vormid.
  4. Seega on meetod turvaline lastele.
  5. Nakkus tuvastatakse igal etapil.
  6. PCR ei võimalda varjata isegi väikest arvu baktereid.
  7. Sobib tuberkuloosi võimaliku kordumise kontrollimiseks.

Kui palju tuberkuloosi röga analüüs

Proovid võetakse rohkem kui üks kord. Kordused välistavad vigade võimalikkuse või halva kvaliteediga materjali saamise, mis ei kajasta patsiendi tegelikku asendit ja seisundit. Kui mitu korda röga koguda, rääkige sellest arstile. Parim valik on kolm korda päevas. Mõnikord võib vaja minna täiendavaid proove. Mis aja jooksul nad koguvad:

  1. Enne söömist hommikul.
  2. 3-4 tundi pärast esimest katset.
  3. Teisel päeval, ka enne sööki.

Tuberkuloos on ohtlik haigus, mis võib mõjutada iga inimese keha. On palju infektsiooni olukordi. Kui teil on kahtlus nakkuse võimalikkuse suhtes, ärge oodake eredaid sümptomeid. Ravi alustamiseks tuleb seda testida, uurida ja aega.

Tuberkuloosi PCR-diagnoos lastel ja täiskasvanutel: näidustused

Maailma Tervishoiuorganisatsioon tunnistas 20 aastat tagasi, et tuberkuloosi leviku määr oli kontrolli all ja jõudis epideemia ulatuseni. Sellest ajast peale ei ole olukord paranenud. Igal aastal diagnoositakse rohkem kui miljon haigusjuhtu, millest peaaegu veerand on surmaga lõppenud. Viimase kümne aasta jooksul on laste esinemissagedus suurenenud, enamik haiguse vorme ei sobi antibiootikumide standardravi jaoks.

Tänapäeval on üks meditsiinilistest globaalsetest ülesannetest selliste diagnostiliste meetodite väljatöötamine, mis võimaldavad tuvastada patoloogiat enne väljendunud kliiniliste sümptomite ilmnemist. Üks neist on tuberkuloosi polümeraasi ahelreaktsioon (PCR), mis aitab tuvastada Kochi haigust põhjustavaid pulgad veres, röga ja muudes bioloogilistes vedelikes.

Tuberkuloosi diagnoos

Sõelumistestide eesmärk on avastada patsiente, tuberkuloosi kandjaid ja ennetada nakkuse levikut ühiskonnas. Alla 14-aastastele lastele kasutatakse massiivselt Mantoux'i testi. See on immunoloogiline test, milles tuberkuliini annust süstitakse subkutaanselt - mitut tüüpi mükobakterite geneetilise materjali kompleksne segu. Spetsiaalse reaktsiooni ilmnemine näitab aktiivselt esinevat nakkuslikku protsessi.

Ennetuslikuks uurimiseks täiskasvanutel, kasutades fluorograafiat või röntgenikiirgust. Need meetodid aitavad visualiseerida kopsukoe patoloogilisi kahjustusi. Siiski tekitab see raskusi tuberkuloosi eristamisel teisest orgaanilisest patoloogiast (pahaloomulised ja healoomulised kasvajad, põletikulised protsessid, parasiitide sissetungid, professionaalne kopsukahjustus).

Patoloogilise fookuse struktuuri ja suuruse selgitamiseks võib vaja minna täiendavaid instrumentaalseid uuringuid:

  • suunatud radiograafia;
  • kompuutertomograafia;
  • magnetresonantstomograafia.

Tuberkuloosi diagnoosimise meetodid

Kahtlaste tulemuste ja piisava ravi määramiseks on vaja täpsemaid diagnostilisi meetodeid, mis võimaldavad patogeeni isoleerida. Tuberkuloosi pulmonaarsete vormide kinnitamiseks kasutatakse pika aja mikroskoopilist ja bakterioloogilist uurimist.

Viimastel aastatel on mitmesuguste elundite ja süsteemide - neerude, luude, soolte, naha - esinemissagedus muutunud sagedasemaks. Tuberkuloosi nende vormide tuvastamiseks võib kasutada ultraheliuuringuid, uriini ja väljaheite kultuuri, endoskoopilisi uuringuid.

Tuberkuloosi PCR-i diagnostika aitab kinnitada Kochi pulgade olemasolu veres, samuti selle tundlikkust teatud ravimite suhtes. See on väga tõhus meetod, mis põhineb bakteriaalse geneetilise materjali avastamisel mitmesugustes bioloogilistes vedelikes.

Spetsiifilisus ja tähised

Polümeraasi ahelreaktsioon on väga tundlik mikrobioloogiline diagnostiline meetod, mis põhineb geenitehnoloogia põhimõtetel. Patogeeni olemasolu kinnitamiseks bioloogilises materjalis piisab selle jaoks unikaalse nukleiinhappe fragmendi tuvastamisest. Tuberkuloosi PCR võib tuvastada vere, röga, uriini baktereid.

Hetkel on välja töötatud mitu analüüsimeetodit. Kõige populaarsem neist on järgmised:

  • Reaalaja PCR;
  • mikrofluidiline tehnoloogia;
  • sekveneerimine ja püroseerumine.

Reaalaja PCR

Laborid kasutavad kõige sagedamini reaalajas polümeraasi ahelreaktsiooni, kuna see vähendab valepositiivsete tulemuste arvu ja analüüsiprotsess ise võtab lühikese aja.

Arvestades haiguse peidetud vormide suurt arvu ja standardsete diagnostikameetodite ebaefektiivsust, kasutatakse üha enam PCR-i. Selle analüüsi eesmärk on näidatud aadressil:

  • röntgenkiirte kahtlaste alade kindlakstegemine;
  • kahtlaste tuberkuliinitestide tulemused;
  • tõsise seisundiga inimeste röga mikroskoopilise ja bakterioloogilise analüüsi teostamise võimatus;
  • kirurgiliste sekkumiste läbiviimine, kui on vaja kiiresti tagada nakkuse puudumine;
  • fluorograafia, röntgenkiirte või kompuutertomograafia kasutamise lubamatus (nt rasedatel ja rinnaga toitvatel lastel, kiirgusdoosi ületamise korral);
  • kahtlustatakse ekstrapulmonaalset tuberkuloosi (on soovitatav kasutada mitte ainult verd, vaid ka limaskesta).

Tuberkuloosi PCR-diagnostika on tõestanud end laste uurimisel täiendava ekspositsiooni ja kiirete tulemuste puudumise tõttu.

Ettevalmistus ja analüüs

Eriline preparaat vere PCR-i jaoks ei ole vajalik. Vereproovide tüsistuste vältimiseks ja kvaliteetse materjali saamiseks tuleb järgida järgmisi üldreegleid:

  • analüüs tuleb teha hommikul mitte varem kui 2 tundi pärast ärkamist;
  • See peaks piirama rasvaste ja praetud toiduainete tarbimist päev enne vereproovide võtmist;
  • hoiduda 8-9 tunni jooksul söömisest, teest ja kohvist, on lubatud juua puhast vett;
  • Mitte suitsetada vähemalt 3-4 tundi.

Püsivate ravimite (hormoonid, antikoagulandid, põletikuvastased ravimid, antibiootikumid, vere vedeldid) puhul peate sellest teavitama laboratoorset assistenti.

Röga kohaletoimetamisel peate hambad hästi harjatama ja suu mitu korda loputama. Koguge materjal steriilsesse anumasse. Paremate tulemuste saamiseks võib õhtul võtta röga- või mukolüütilist ainet.

Diagnoos ise koosneb mitmest etapist.

    Aia materjal. Seda saab teha laboris ja eemalt. Mõned materjalitüübid, mida patsient ise kogub (uriin, flegma).

Nukleiinhapete struktuuri hävitamine (DNA ja RNA molekulide denatureerimine). Selleks kuumutatakse katsematerjali 98 kraadi temperatuurini ja hoitakse mitu minutit. Selle tulemusena kahekordse heeliksi lahti kerkib, moodustuvad üheahelalised molekulid.

  • Hõõrdumine Pärast praimeri lisamist (lühike nukleiinhappe osa) langeb temperatuur mitu kraadi, aktiveerub polümeraas.
  • Tuvastus. Temperatuur saavutatakse optimaalsele tasemele, ensüümi aktiivsus jõuab maksimaalse tasemeni ja teine ​​ahel viiakse lõpule vastavalt Chargaffi komplementaarsuse reeglile.

    • Uuringu lõpuleviimiseks on vaja sünteesida vajalik arv DNA molekule - umbes 50 tsükli ülaltoodud reaktsiooni. See võtab aega umbes 2-3 tundi. Reaktsiooni positiivne tulemus ei näita alati haiguse aktiivset etappi, vaid näitab mikroorganismi olemasolu organismis.

    Meetodi eelised ja puudused

    Võrreldes teiste mikrobioloogiliste meetoditega, ei võta PCR-iga PCR-iga PCR-iga PCR-iga PCR-i abil pikka aega aega, tulemust on võimalik saada testimise päeval.

    Teiseks eeliseks on analüüsi kõrge spetsiifilisus, mis võimaldab tuvastada patogeeni olemasolu 90-95% täpsusega peaaegu igas biomaterjalis (veri, uriin, väljaheited, tserebrospinaalvedelik, röga, bronhide lopetus).

    Meetodi puhul on siiski mitmeid puudusi:

    • üsna kõrge valepositiivsete tulemuste protsent (kuni 15%), mis on seotud elusate mikroorganismide avastamisega;
    • mõnel juhul võite haiguse tõrjumise vahele jätta, sest Mycobacterium tuberculosis'e suhtes rakendatakse sageli mutatsioone ja nende geneetilisi materjale;
    • immuunpuudulikkusega inimeste uurimise madal efektiivsus;
    • kõrgete hindadega, vajadus kalli varustuse ja reaktiivide järele.

    Mida saab asendada?

    Arvestades tuberkuloosi nakkuse erinevaid vorme, täpsemat diagnoosi ja ravi valikut, on vaja kombineerida mitmeid diagnostilisi uuringuid:

      Laste kohustuslik analüüs on Mantoux'i test. Kui tuberkuliini (mükobakterite geneetiline materjal) sissetoomine ilmneb selgelt, võib eeldada, et see nakatub tuberkuliiniga.

    Patoloogilise fookuse visualiseerimiseks võib kasutada röntgenmeetodeid. Ekstrapulmonaalse tuberkuloosi diagnoosimisel kasutatakse samaaegse biopsiaga endoskoopilisi meetodeid:

    • bronhoskoopia aitab tuvastada kõri, hingetoru, bronhide kahjustusi;
    • kolonoskoopia - sooled;
    • tsüsteetroskoopia - kuseteede organid;
    • hüsteroskoopia - naiste suguelundid. Need meetodid ei ole spetsiifilised, täpseks diagnoosimiseks tuleb tuvastada patogeen.

    Üldised kliinilised testid aitavad keha seisundit täpsemalt kindlaks määrata. Vajalik on täielik vereloome leukotsüütide valemiga.

    Vähendatud lümfotsüütide taseme neutrofiilide arvu suurenemine ja erütrotsüütide sadestumiskiiruse (ESR) suurenemine näitab bakteriaalse etioloogia aktiivset põletikulist protsessi. Vältida kuseteede organite kahjustusi, kasutades üldist uriinianalüüsi ja steriilsuse kultuuri.

    PCR on praegu saadaval enamikes erasektorites. See nõuab mitte ainult kõrgelt kvalifitseeritud spetsialiste, vaid ka kalleid seadmeid, suurt hulka reaktiive. Seetõttu on selle meetodi kasutamine piiratud, hoolimata selle suurest täpsusest ja spetsiifilisusest.

    PCR (a) tuberkuloosi diagnoosimise eelised ja puudused

    Inimkudedes ja -struktuuris on paljude aastate jooksul esinenud spetsiifilist tuberkuloosi nakatumist ning teatud tingimustel levib see kogu kehas kiiresti 2-3 kuu jooksul. Mõnikord on parim ravikuur väga raske valida, kuna patogeen on paljude ravimite hiline diagnoosimine ja kohandamine.

    Tuberkuloosi viimane PCR-diagnoos aitab avastada mitte ainult arenenud haigust, vaid ka ennast patogeeni, kui haiguse esimesed tunnused ei ole veel ilmunud.

    Mis on PCR?

    Hiljuti ilmnes tuberkuloosi diagnoos PCR abil. 1983. aastal leiutas Ameerika mikrobioloog Cary Mullis protseduuri, mille abil saab mikroorganismid lühikese segmendi bioloogilisest materjalist rekonstrueerida. See töö on teeninud Nobeli preemia.

    Tuberkuloosi PCR on polümeeri ahelprotsess, kus viiruse patogeenide diagnoosimine ja avastamine geenitehnoloogia abil. Seda meetodit kasutatakse immunoloogilistes, mikrobioloogilistes, viroloogilistes ja biokeemilistes laborites.

    Universaalne meetod aitab arstidel diagnoosida ja tuvastada nakkuslikku protsessi isegi pärast esimest infektsiooni tundi, kaua enne sümptomite algust. Teadusuuringud on võimalikud isegi väikese koguse biomaterjaliga.

    Mida on vaja analüüsiks?

    • Mitmed DNA segmendid (praimerid), millega algab bioloogiline süntees;
    • Nukleotiidühendid, DNA molekuli või RNA alus;
    • Polümeraasi ensüüm, mis kiirendab PCR analüüsi.

    Mis on meetodi alus?

    Esiteks, nakatunud isiku biomaterjalist ekstraheeritakse DNA segment, kasutades geenimolekulaarseid biosünteesi meetodeid, lisaks määratakse kindlaks mikroorganismide tüüp, millesse biofragment kuulub.

    See keeruline reaktsioon võtab vähem aega kui mõned biomeetrid. PCR määrab patogeeni mõne tunni pärast, kuid puudub vajadus isoleerida seda bioloogilisest vedelikust (röga, tserebrospinaalne või vere keskkond), ei ole vaja seda pikka aega toitaineel kasvatada. Piisab, et uuritud materjal sisaldab nakkusliku patogeeni DNA ahelat.

    In vitro tuberkuloosi PCR-vereanalüüsi läbiviimisel luuakse kunstlikult mükobakteri tuberkuloosi ribonukleiinhapete süntees.

    Diagnoosi etapid

    Molekulaarne reaktsioon PCR-iga on lihtne protseduur, mis võtab vähe aega. Vajalik biomaterjal võetakse: verd, röga, bronhide pesuvedelikku kasutatakse tbc määramiseks.

    1. Esiteks hävitatakse DNA esmane vorm, 2 ahelat eraldatakse kõrgel temperatuuril (maksimaalselt 98 ° C mitte rohkem kui 2 minutit);
    2. Seejärel teostatakse anniilimine, primaarne temperatuur väheneb mitme jaotusega, DNA ahel on seotud praimeriga;
    3. Järgmist etappi nimetatakse pikenduseks, kusjuures vajalike molekulaarstruktuuride biosüntees.

    Vajaliku arvu DNA koopiate saamiseks peab läbima 25 kuni 30 sellist tsüklit ja sellest tulenev mükobakterite arv on kergesti äratuntav.

    Kas tuberkuloosi suhtes on vaja teha PCR?

    Otseselt kõigile patsientidele, kellel on kahtlustatav TVC, ei tehta ahela diagnostikat, kuna protseduur nõuab kallis seadmete kasutamist. Mitte kõik meditsiiniasutused ei luba seda osta, eriti kuna mükobakterite tuberkuloosi diagnoosimise tavalised meetodid on ka informatiivsed.

    • Hoolikas ajalugu, patsiendi küsitlemine;
    • Väline eksam;
    • Mantoux tuberkuliini test;
    • Radiograafiline või fluorograafiline uurimine;
    • Vajadusel arvuti diagnostika;
    • Maski mikroskoopiline või bakterioloogiline uurimine röga abil.

    Tuberkuloosi PCR tehakse ainult siis, kui ei ole võimalik teostada teist instrumentaalset analüüsi või olukordades, mida on raske diagnoosida.

    Hoolimata paljudest diagnostikameetoditest, on tuberkuloosiga patsientide arv jätkuvalt kasvanud. Lisaks on esinemissagedus omandanud mõned omadused: sageli täheldatakse haiguse rasket vormi, surmajuhtumite arv suureneb, patogeen muutub resistentseks olemasolevate kemoteraapia ravimite suhtes.

    Paljud inimesed ei taha igal aastal rutiinset kontrolli läbi viia, keelduvad vaktsineerimisest, mis viib esinemissageduse suurenemiseni. Sellised asjaolud nõuavad tõhusaid ja informatiivseid uurimismeetodeid, mis on kättesaadavad täiskasvanutele ja lastele, kellel on diagnoositud tbc. PCR-il on teiste diagnostiliste meetoditega võrreldes eelised.

    Milline on meetodi väärtus?

    See viimane uurimus on end hästi tõestanud. Kui mitmel põhjusel on raske diagnoosida või mõnel vastuolulisel juhul tuvastab PCR tuberkuloosi bakterile kergemini kui muud meetodid.

    • See kiire uuring, molekuli väike segment võimaldab lühikese aja jooksul täpselt diagnoosida umbes 5 tunni jooksul, seda kasutatakse hädaolukordades, näiteks enne kiiret kirurgilist sekkumist;
    • Tuberkuloosi vereanalüüs on võimalik siis, kui teised meetodid ei ole kättesaadavad või vastunäidustatud - mõnikord tbc patogeeni avastamiseks tuleb võtta palju Rg-kaadreid, kusjuures kiirgusdoos on liiga suur;
    • Kasutades polümeraasi reaktsiooni, võib mistahes bioloogilisi vedelikke uurida mükobakterite esinemise suhtes. Näiteks võite läbi viia uuringu tserebrospinaalvedeliku kohta, kus on tuberkuloosne meningiit või urogenitaalse tuberkuloosi uriin;
    • Meetod on ohutu, PCR-i kasutavate laste tuberkuloosi diagnoos ei põhjusta raskusi;
    • Polümeerireaktsiooni meetod paljastab mistahes haiguse vormis ja staadiumis tuberkuloosse batsilli.
    • Ainult mõne bakteri olemasolu biomaterjalis võimaldab teil näha mikroorganismide olemasolu, kuna see on tundlik reaktsioon;
    • PCR diagnoosib haiguse kordumise kergesti.

    Hoolimata suurtest eelistest, ei ole kõik patsiendid, kellel on kahtlus tbc uuringu üle, tehtud, kuna on ka puudusi, neid võetakse arvesse.

    Video

    Video - varane diagnoosimine

    Millised on puudused?

    See diagnoosimeetod on pigem erandlik kui loomulik, sest selleks on põhjused. Esiteks võetakse arvesse meetodi kõrgeid kulusid. Seadmed on kallid, avalikel kliinikutel ei ole võimalust seda kõrge hinna tõttu osta, kuid enamikul tasulistel laboritel on seadmed, neid analüüsitakse.

    • Meetod tuvastab surnud bakterid, mis on surnud pärast ravi, samas kui PCR näitab positiivset tulemust. Kohe pärast keemiaravi ei ole mõtet uurimist läbi viia, sest tulemus ei ole usaldusväärne;
    • Mycobacterium tuberculosis mutatsioonid on vastuvõtlikud, mis toob kaasa meetodi ebaefektiivsuse ja DNA ahelat ei ole võimalik järjekindlalt sünteesida.

    Uuringu keskkond tuleb hoolikalt valida, verd või uriini saab koguda ainult siis, kui on kahtlus nakkuse suhtes. Luude tuberkuloosi kahtluse korral ei tohiks röga uurimiseks uurida. Sellises olukorras on diagnoos vale.

    PCR-iga uuritava tuberkuloosiga patsiendi verd ja uriini võetakse harva, seega on haiguse tuvastamine küsitav. Nendes bioloogilistes keskkondades määratakse patogeen ainult sepsis või levinud tuberkuloosi korral. Kõige tavalisemad on kohalikud vormid, nende veri ja uriin võivad jääda muutumatuks. Kõige sagedamini võetakse uurimiseks flegma.

    Kes näitab analüüsi?

    Enamik patsiente saadetakse PCR diagnoosimiseks vastuolulistel ja rasketel tuberkuloosijuhtudel. Millal väljastavad meditsiinitöötajad uurimiseks viiteid?

    1. Kui on olemas kontakt isikuga, kellele on diagnoositud tuberkuloosi, on raske diagnoosida tavapäraseid meetodeid kasutades;
    2. Neil asjaoludel, kui patsient on kliiniku osutamiseks võimatu röntgenograafia või muu uuringu tegemiseks. Sellises olukorras on seda lihtsam kontrollida polümeeri meetodil. Röga analüüs viiakse laborisse lihtsalt spetsiaalsesse konteinerisse ja tulemus saab mõne tunni pärast teada;
    3. Enne operatsiooni on hädavajalik kindlaks teha, kas patsient on haigestunud tuberkuloosiga, millisel juhul on näidatud PCR;
    4. Meetodi ohutuse tõttu on võimalik läbi viia raseduse või lapse uuring ilma täiendava röntgenkoormuse tekitamiseta;
    5. Kahtlikud Mantoux'i testitulemused.

    Igaüks, kes soovib, saab tasu eest uurida, kui bakterioloogia ja fluoroskoopia abil ei ole tuberkuloosi kinnitatud. See juhtub siis, kui kopsukoe kahjustus on otseses projektsioonis nähtamatu Rg-pildis ja patsient ei suuda röga korrektselt koguda, kuid inimese tuberkuloosi tunnused on häiritud.

    Kaasaegne PCR reaktsioon diagnoosimiseks on eduka ravi võti, mille tagajärjel väheneb haiguse levimus. Tavapärased haiguste tuvastamise meetodid ei anna alati soovitud efekti.

    Seega on tänaseks PCR-analüüs muutunud üheks usaldusväärseks ja ohutuks diagnoosimeetodiks haiguse varases staadiumis.

    Täiendav Artikleid Larüngiit