Tuberkuloosi polümeraasi ahelreaktsioon (PCR)

Tuberkuloos on üks kõige ohtlikumaid haigusi, millest inimkond on kannatanud sadu aastaid. Kuigi teadlased suutsid tuvastada haigustekitajat ja selle kõrvaldamiseks antibiootikume, ei ole ravi alati edukas. Peamine põhjus on haiguse pikk varjatud või varjatud vorm, mis võib kesta mitu aastat. Hiline diagnoosimine vähendab oluliselt patsiendi taastumisvõimalusi ja täielikku elu.

Mis on PCR?

Mükobakterite tuberkuloosi avastamiseks organismis üle saja aasta on Mantoux'i testi edukalt kasutatud. Teised meetodid on end hästi tõestanud: bakterioloogiline kultuur kunstlikes keskkondades, mustri mikroskoopia, ELISA. Kuid suur hulk tüsistusi ja valepositiivseid tulemusi, samuti mõnede meetodite kestus vajasid uute tehnoloogiate juurutamist diagnostikasse. Suur läbimurre mikrobioloogia valdkonnas oli tuberkuloosi PCR-analüüsi teke. Juba mitu aastakümmet on see olnud tõhus ja seda kasutatakse laialdaselt tuberkuloosi eri vormide diferentsiaaldiagnoosimiseks.

Tuberkuloosi või polümeraasi ahelreaktsiooni PCR analüüs on meetod bakterite või nende fragmentide DNA tuvastamiseks, mis põhineb nukleiinhappemolekulide suurenemisel ensüümi DNA polümeraasi toimel. Positiivse tulemuse saamiseks piisab ainult ühest patogeensest DNA molekulist, seetõttu peetakse seda meetodit väga tundlikuks. OCP diagnoos tuberkuloosi korral on efektiivsem kui mükobakterite külvamine kunstlikus keskkonnas, kuna erinevalt kultiveerimismeetodist võimaldab see eristada looduslikke ja vaktsiini tüvesid, mis on vaktsineeritud BCG-ga. See väldib valepositiivseid tulemusi ja muudab diagnoosi täpsemaks.

PCRi eelised

Tuberkuloosi PCR-diagnostika võimaldab tuvastada Koch bacillust organismi mis tahes bioloogilises keskkonnas, määrates nende kvantitatiivse kompositsiooni isegi haiguse algstaadiumis, kui mükobakterid on talveunest. Haiguse diagnoosimine latentses faasis võimaldab aegsasti alustada profülaktilist ravi, et vältida kopsupõletike fookuste teket ja komplikatsioonide ilmnemist teistes elundites ja süsteemides. Lisaks on tuberkuloosi PCR-testil mitmeid eeliseid:

• kõrge spetsiifilisus - 90-100%;
• suur kiirus - 4 tundi kuni 2 päeva;
• kõrge tundlikkus, eriti immuunpuudulikkuse korral;
• diferentsiaaldiagnoos.

Meetodi peamiseks eeliseks on see, et lastel tuberkuloosi CRC-diagnoos võimaldab eristada haiguse levinud vormi piiratud fookusest, isegi teiste testide negatiivsete tulemustega. Diferentsiaalne testimine võimaldab teil valida õige ravirežiimi ja suurendada ravi efektiivsust.

Analüüsi kõrge spetsiifilisus saavutatakse ristreaktsioonide kõrvaldamisega teiste nukleiinhappemolekulidega ja kõrge tundlikkus võimaldab tuvastada mükobaktereid isegi kogutud materjali väikestes kogustes. Tuberkuloosi röga PCR-meetodil on suurim usaldusväärsus, selle spetsiifilisus ulatub 100% -ni võrreldes teiste bioloogiliste materjalidega.

PCR-i erimehhanism pakub piisavalt võimalusi Koch-pulgade avastamiseks immuunpuudulikkusega patsientidel. Analüüsimeetodi kohaselt tuvastab reaktsioon antigeene, seega ei ole oluline, kas organism toodab patogeeni antikehi või mitte. Seega on võimalik diagnoosida haiguse ekstrapulmonaalseid vorme ja kaugelearenenud juhtumeid patsientidel, kellel on immuunsüsteemi vigu, mis on teiste meetodite abil võimatu.

Meetodi puudused

Vaatamata analüüsi paljudele eelistele ja suurele tundlikkusele võib tuberkuloosi PCR anda vale negatiivse tulemuse. Kuna diagnoosimiseks võetakse väga väike kogus biomaterjali, siis asjaolu, et patogeeni "peidab" rakus või põletikulises fookuses, ei ole välistatud ja seda ei vabastata väljapoole.

Selle meetodi tundlikkus lastel on 25-80%. Näiteks randomiseeritud uuringus kliiniliselt tõestatud diagnoosiga patsientide grupis andis PCR-i vereanalüüs tuberkuloosi suhtes positiivse tulemuse ainult 50% patsientidest. Sellega seoses ei ole lapse patogeensete mükobakterite testimisel võimalik asendada üht diagnostikameetodit teisega. Infektsiooni puudumise täielikuks kontrollimiseks on vaja läbi viia põhjalik uuring mitmel viisil korraga.

Kogumisprotsess

PCR-diagnostika usaldusväärsuse peamiseks tingimuseks on vastavus bioloogiliste vedelike kogumise eeskirjadele. Saastunud või valesti kogutud materjal võib põhjustada ebaõigeid tulemusi. Kõige tavalisemad on röga, vere ja uriini analüüs, kuid sügavama diferentsiaaldiagnoosi jaoks on võimalik võtta proove mao, sünoviaalvedeliku, tserebrospinaalvedeliku, bronhide loputusvedeliku, sperma, eesnäärme sekretsiooni kohta.

Uriini PCR tuberkuloosi suhtes võetakse hommikul pärast välist hügieeni, urineerides steriilsesse anumasse. Protseduuri ajal on oluline mitte puudutada konteineri siseseinu, et vältida kolmandate isikute mikroorganismide sisenemist. Naised, kes elavad regulaarse seksuaalelu, peaksid kindlasti panema tampooni tupe, et vältida kolmanda osapoole heakskiitu.

Vereproov võetakse hommikul tühja kõhuga ja tuberkuloosi röga PCR-i saab teha igal ajal päeval, kohustusliku suuhügieeniga. See on vajalik toidu jääkide eemaldamiseks, mis võivad konteinerisse siseneda. Röga väljavõtmisel on oluline hoida ära sülje ja lima sissetung nasofarünnist mahutisse, mis võib moonutada analüüsiandmeid.

Mao sisu uurimine toimub haiglas varahommikul, samal ajal kui öösel alla neelatud röga on maos. Mükobakterite tuberkuloosi tuvastamiseks selle meetodiga teevad nad kolmekordse külvamise, mis tõenäoliselt võimaldab Kochi võlukeha isoleerida.

Tulemuste dekodeerimine

PCR kvalitatiivne analüüs annab 2 tüüpi tulemusi "avastatud" või "ei tuvastatud". Need tähendavad vastavalt positiivset ja negatiivset otsust. Vastus "avastatud" tähendab, et nakkusetekitaja DNA on testproovis ja 97% tõenäosusega on organism nakatunud tuberkuloosiga. Negatiivne tulemus näitab, et Kochil ei ole bioloogilise materjali proovis DNA-d, ja annab 97% tõenäosuse, et kehal ei ole palju mükobaktereid ja 60%, et inimene ei ole nakatunud.

Tuberkuloosi diagnoosimise suurim spetsiifilisus on vereanalüüs ja röga. Positiivse tulemusega viitavad nad keha nakatumisele, mis nõuab kiireloomulisi ravimeetmeid. Teiste biomaterjalide uuringud võivad viidata mitte haiguse kulgemisele, vaid ainult võõraste bakterite esinemisele. See juhtub siis, kui inimene on haiguse kandja, kuid ei levita nakkust keskkonda ega nakka terveid inimesi.

Kvantitatiivne PCR analüüs viiakse läbi harvemini ja raviarst tegeleb selle tulemuste dekodeerimisega. Uuringu indikaatoreid kasutatakse haiguse aktiivsuse ja keha kahjustamise ulatuse määramiseks. Saadud andmete põhjal võib spetsialist määrata ravi efektiivsuse ja vajadusel kohandada raviskeemi.

Tuberkuloos on alati olnud ja on üks inimkonna tervisele kõige tõsisemaid probleeme. Kaasaegsed diagnostikameetodid suudavad haigust varajases staadiumis avastada, et alustada ravi õigeaegselt. Tuberkuliiniproov, mustri mikroskoopia, bakterite kultuur kunstlikel toitainetel on end tõestanud tuberkuloosi laboratoorse diagnoosimise valdkonnas. Kuid pikad ootused tulemustele ja valepositiivsete lugemite suurenenud sagedus muutsid need vananenuks ja tõstsid esile rohkem arenenud tehnoloogiaid. PCR analüüs on väga spetsiifiline ja väga tõhus meetod tuberkuloosi diagnoosimiseks. Tema tulemused on kõige usaldusväärsemad kõigi Koch-pulgade avastamise laboratoorsete meetodite seas. See võimaldab mitte ainult teha lõplikku otsust, vaid ka vajalikku diferentsiaaldiagnoosi.

Tuberkuloosi PCR-diagnoos lastel ja täiskasvanutel: näidustused

Maailma Tervishoiuorganisatsioon tunnistas 20 aastat tagasi, et tuberkuloosi leviku määr oli kontrolli all ja jõudis epideemia ulatuseni. Sellest ajast peale ei ole olukord paranenud. Igal aastal diagnoositakse rohkem kui miljon haigusjuhtu, millest peaaegu veerand on surmaga lõppenud. Viimase kümne aasta jooksul on laste esinemissagedus suurenenud, enamik haiguse vorme ei sobi antibiootikumide standardravi jaoks.

Tänapäeval on üks meditsiinilistest globaalsetest ülesannetest selliste diagnostiliste meetodite väljatöötamine, mis võimaldavad tuvastada patoloogiat enne väljendunud kliiniliste sümptomite ilmnemist. Üks neist on tuberkuloosi polümeraasi ahelreaktsioon (PCR), mis aitab tuvastada Kochi haigust põhjustavaid pulgad veres, röga ja muudes bioloogilistes vedelikes.

Tuberkuloosi diagnoos

Sõelumistestide eesmärk on avastada patsiente, tuberkuloosi kandjaid ja ennetada nakkuse levikut ühiskonnas. Alla 14-aastastele lastele kasutatakse massiivselt Mantoux'i testi. See on immunoloogiline test, milles tuberkuliini annust süstitakse subkutaanselt - mitut tüüpi mükobakterite geneetilise materjali kompleksne segu. Spetsiaalse reaktsiooni ilmnemine näitab aktiivselt esinevat nakkuslikku protsessi.

Ennetuslikuks uurimiseks täiskasvanutel, kasutades fluorograafiat või röntgenikiirgust. Need meetodid aitavad visualiseerida kopsukoe patoloogilisi kahjustusi. Siiski tekitab see raskusi tuberkuloosi eristamisel teisest orgaanilisest patoloogiast (pahaloomulised ja healoomulised kasvajad, põletikulised protsessid, parasiitide sissetungid, professionaalne kopsukahjustus).

Patoloogilise fookuse struktuuri ja suuruse selgitamiseks võib vaja minna täiendavaid instrumentaalseid uuringuid:

• suunatud radiograafia;
• kompuutertomograafia;
• magnetresonantstomograafia.

Tuberkuloosi diagnoosimise meetodid

Kahtlaste tulemuste ja piisava ravi määramiseks on vaja täpsemaid diagnostilisi meetodeid, mis võimaldavad patogeeni isoleerida. Tuberkuloosi pulmonaarsete vormide kinnitamiseks kasutatakse pika aja mikroskoopilist ja bakterioloogilist uurimist.

Viimastel aastatel on mitmesuguste elundite ja süsteemide - neerude, luude, soolte, naha - esinemissagedus muutunud sagedasemaks. Tuberkuloosi nende vormide tuvastamiseks võib kasutada ultraheliuuringuid, uriini ja väljaheite kultuuri, endoskoopilisi uuringuid.

Tuberkuloosi PCR-i diagnostika aitab kinnitada Kochi pulgade olemasolu veres, samuti selle tundlikkust teatud ravimite suhtes. See on väga tõhus meetod, mis põhineb bakteriaalse geneetilise materjali avastamisel mitmesugustes bioloogilistes vedelikes.

Spetsiifilisus ja tähised

Polümeraasi ahelreaktsioon on väga tundlik mikrobioloogiline diagnostiline meetod, mis põhineb geenitehnoloogia põhimõtetel. Patogeeni olemasolu kinnitamiseks bioloogilises materjalis piisab selle jaoks unikaalse nukleiinhappe fragmendi tuvastamisest. Tuberkuloosi PCR võib tuvastada vere, röga, uriini baktereid.

Hetkel on välja töötatud mitu analüüsimeetodit. Kõige populaarsem neist on järgmised:

• Reaalaja PCR;
• mikrofluidiline tehnoloogia;
• sekveneerimine ja püroseerumine.

Reaalaja PCR

Laborid kasutavad kõige sagedamini reaalajas polümeraasi ahelreaktsiooni, kuna see vähendab valepositiivsete tulemuste arvu ja analüüsiprotsess ise võtab lühikese aja.

Arvestades haiguse peidetud vormide suurt arvu ja standardsete diagnostikameetodite ebaefektiivsust, kasutatakse üha enam PCR-i. Selle analüüsi eesmärk on näidatud aadressil:

• röntgenkiirte kahtlaste alade kindlakstegemine;
• kahtlaste tuberkuliinitestide tulemused;
• tõsise seisundiga inimeste röga mikroskoopilise ja bakterioloogilise analüüsi teostamise võimatus;
• kirurgiliste sekkumiste läbiviimine, kui on vaja kiiresti tagada nakkuse puudumine;
• fluorograafia, röntgenkiirte või kompuutertomograafia kasutamise lubamatus (nt rasedatel ja rinnaga toitvatel lastel, kiirgusdoosi ületamise korral);
• kahtlustatakse ekstrapulmonaalset tuberkuloosi (on soovitatav kasutada mitte ainult verd, vaid ka limaskesta).

Tuberkuloosi PCR-diagnostika on tõestanud end laste uurimisel täiendava ekspositsiooni ja kiirete tulemuste puudumise tõttu.

Ettevalmistus ja analüüs

Eriline preparaat vere PCR-i jaoks ei ole vajalik. Vereproovide tüsistuste vältimiseks ja kvaliteetse materjali saamiseks tuleb järgida järgmisi üldreegleid:

• analüüs tuleb teha hommikul mitte varem kui 2 tundi pärast ärkamist;
• See peaks piirama rasvaste ja praetud toiduainete tarbimist päev enne vereproovide võtmist;
• hoiduda 8-9 tunni jooksul söömisest, teest ja kohvist, on lubatud juua puhast vett;
• Mitte suitsetada vähemalt 3-4 tundi.

Püsivate ravimite (hormoonid, antikoagulandid, põletikuvastased ravimid, antibiootikumid, vere vedeldid) puhul peate sellest teavitama laboratoorset assistenti.

Röga kohaletoimetamisel peate hambad hästi harjatama ja suu mitu korda loputama. Koguge materjal steriilsesse anumasse. Paremate tulemuste saamiseks võib õhtul võtta röga- või mukolüütilist ainet.

Diagnoos ise koosneb mitmest etapist.

Aia materjal. Seda saab teha laboris ja eemalt. Mõned materjalitüübid, mida patsient ise kogub (uriin, flegma).

Nukleiinhapete struktuuri hävitamine (DNA ja RNA molekulide denatureerimine). Selleks kuumutatakse katsematerjali 98 kraadi temperatuurini ja hoitakse mitu minutit. Selle tulemusena kahekordse heeliksi lahti kerkib, moodustuvad üheahelalised molekulid.

Hõõrdumine Pärast praimeri lisamist (lühike nukleiinhappe osa) langeb temperatuur mitu kraadi, aktiveerub polümeraas.

Tuvastus. Temperatuur saavutatakse optimaalsele tasemele, ensüümi aktiivsus jõuab maksimaalse tasemeni ja teine ​​ahel viiakse lõpule vastavalt Chargaffi komplementaarsuse reeglile.

Uuringu lõpuleviimiseks on vaja sünteesida vajalik arv DNA molekule - umbes 50 tsükli ülaltoodud reaktsiooni. See võtab aega umbes 2-3 tundi. Reaktsiooni positiivne tulemus ei näita alati haiguse aktiivset etappi, vaid näitab mikroorganismi olemasolu organismis.

Meetodi eelised ja puudused

Võrreldes teiste mikrobioloogiliste meetoditega, ei võta PCR-iga PCR-iga PCR-iga PCR-iga PCR-i abil pikka aega aega, tulemust on võimalik saada testimise päeval.

Teiseks eeliseks on analüüsi kõrge spetsiifilisus, mis võimaldab tuvastada patogeeni olemasolu 90-95% täpsusega peaaegu igas biomaterjalis (veri, uriin, väljaheited, tserebrospinaalvedelik, röga, bronhide lopetus).

Meetodi puhul on siiski mitmeid puudusi:

• üsna kõrge valepositiivsete tulemuste protsent (kuni 15%), mis on seotud elusate mikroorganismide avastamisega;
• mõnel juhul võite haiguse tõrjumise vahele jätta, sest Mycobacterium tuberculosis'e suhtes rakendatakse sageli mutatsioone ja nende geneetilisi materjale;
• immuunpuudulikkusega inimeste uurimise madal efektiivsus;
• kõrgete hindadega, vajadus kalli varustuse ja reaktiivide järele.

Mida saab asendada?

Arvestades tuberkuloosi nakkuse erinevaid vorme, täpsemat diagnoosi ja ravi valikut, on vaja kombineerida mitmeid diagnostilisi uuringuid:

Laste kohustuslik analüüs on Mantoux'i test. Kui tuberkuliini (mükobakterite geneetiline materjal) sissetoomine ilmneb selgelt, võib eeldada, et see nakatub tuberkuliiniga.

Patoloogilise fookuse visualiseerimiseks võib kasutada röntgenmeetodeid. Ekstrapulmonaalse tuberkuloosi diagnoosimisel kasutatakse samaaegse biopsiaga endoskoopilisi meetodeid:

• bronhoskoopia aitab tuvastada kõri, hingetoru, bronhide kahjustusi;
• kolonoskoopia - sooled;
• tsüsteetroskoopia - kuseteede organid;
• hüsteroskoopia - naiste suguelundid. Need meetodid ei ole spetsiifilised, täpseks diagnoosimiseks tuleb tuvastada patogeen.

Üldised kliinilised testid aitavad keha seisundit täpsemalt kindlaks määrata. Vajalik on täielik vereloome leukotsüütide valemiga.

Vähendatud lümfotsüütide taseme neutrofiilide arvu suurenemine ja erütrotsüütide sadestumiskiiruse (ESR) suurenemine näitab bakteriaalse etioloogia aktiivset põletikulist protsessi. Vältida kuseteede organite kahjustusi, kasutades üldist uriinianalüüsi ja steriilsuse kultuuri.

PCR on praegu saadaval enamikes erasektorites. See nõuab mitte ainult kõrgelt kvalifitseeritud spetsialiste, vaid ka kalleid seadmeid, suurt hulka reaktiive. Seetõttu on selle meetodi kasutamine piiratud, hoolimata selle suurest täpsusest ja spetsiifilisusest.

PCR analüüs tuberkuloosi diagnoosimiseks

Meditsiin ei ole kunagi seisma jäänud ja siiani on tervishoiusektori edusammud võimaldanud diagnoosida ja ravida paljusid varem mõjutamata tervisehäireid. On ka haigusi, mida ei saa visuaalse kontrolliga avastada. Tuberkuloos on alati olnud nende hulgas. See on ohtlik nakkushaigus, mis mõjutab kopse, liigeseid ja luud ning viib sageli surmani isegi meie päevades. Selle haiguse diagnostilisi meetodeid on parandatud, mis võimaldab haigust tuvastada varasemates etappides, kui see on ravitav. Nende hulgas ei ole mitte ainult röntgen- ja mantoux-testid, vaid ka tuberkuloosi PCR.

Tuberkuloos - mis see on

Varem nimetati tuberkuloosi kuivaks haiguseks või phthisiseks. See on bakteriaalne infektsioon, mis kõige sagedamini mõjutab kopse. Selle ekstrapulmonaalsed vormid - luude ja liigeste tuberkuloos, tuberkulaarne meningiit - on vähem levinud ja arenenud staadiumid. Selle nakkushaiguse põhjustaja on mükobakterid. Tuberkuloosi bacillust nimetatakse ka Kochi võlukeksiks.

TB-infektsioon on väga nakkav, see levib õhu kaudu asetatavate tilgakeste kaudu patsiendi köha ja aevastamise ajal. Ainus kaitse selle haiguse vastu on õigeaegselt tarnitud vaktsiin. See ei kaitse nakkuse eest, kuid ei võimalda batsillidel siseneda organismi tuberkuloosi tekitamiseks.

Tuberkuloosi vormid

Haigus võib esineda nii avatud kui ka suletud kujul. Erinevused on järgmised:

• suletud tuberkuloos on asümptomaatiline. Sellistel asjaoludel on röga Koch-võlukepp võimalik tuvastada, mistõttu nakatunud ei ole keskkonnale ohtlik. Selline haiguse kulg ei ohusta tavaliselt kõige nakatunumaid, kuid on ka erandeid - ühel kümnel juhul on suletud tuberkuloos avatud kujul;
• avatud vormis leitakse tuberkuloosi põhjustavad mükobakterid patsiendi süljes ja röga. Nakatunud organism kujutab endast ühiskonnale suurt ohtu, isegi isoleeritult. Üldjuhul mõjutab haigus kõigepealt kopse. Kui seda ei diagnoosita varakult, võib see esineda ka muudes vormides, nagu luude või liigeste tuberkuloos.

Tuberkuloosi avatud vormi diagnoositakse mitmel viisil. Patsient läbib rindkere röntgen- või röntgenikiirguse, analüüsib tema bioloogilist materjali või Mantoux'i nahatesti. Hiljuti on ilmnenud teine ​​meetod, mida peetakse võrdselt tõhusaks - polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) analüüs.

Mida tähendab PCR

Meditsiinipraktikas on selle või selle haiguse diagnoosimise meetodeid inimese organismis DNA või RNA avastamisega juba ammu kasutatud. See on täpselt tuberkuloosi PCR. See on vere või muu bioloogilise vedeliku kõrge täpsusanalüüs, mis võimaldab tuvastada baktereid, mille kontsentratsioon valitud materjalis on minimaalne, üksik rakk on piisav. Uuring viidi läbi spetsiaalse polümeraasi ensüümi abil.

Meetodi eelised

PCR on diagnostiline meetod, mis on näidanud ennast parimal poolel, nii et seda kasutatakse üsna sageli nii teiste meetodite kui ka iseseisvalt kombineeritult. Selle eelised:

• lühimaid tootmistingimusi. Uuring viiakse läbi kiiresti, umbes 5 tunni jooksul võib PCR abil tuvastada tuberkuloosi batsilli esinemine patsiendi bioloogilises vedelikus. See kehtib eriti siis, kui teil on vaja teha kohest kirurgilist sekkumist ja enne seda saada täpne diagnoos;
• See juhtub, et teised diagnostilised meetodid on patsiendile vastunäidustatud. Näiteks saab röntgenikiirgusi teha mitte igaüks. Lisaks ei ole pilt alati võimalik diagnoosida, eriti kui haigus on varases staadiumis. PCR meetodi abil tuvastatakse patogeen kohe;
• Iga patsiendi bioloogiline vedelik on analüüsiks sobiv. Pulmonaarse ja ekstrapulmonaalse vormi tuvastamiseks viiakse läbi tuberkuloosi uriini ja sülje PCR. Uuring viiakse läbi ka patsiendi seljaaju vedeliku abil, et avastada tuberkuloosset meningiiti.
• Meetod on täiesti ohutu. Selle läbiviimiseks piisab patsiendilt bioloogilise vedeliku saamiseks. Tuberkuloosi PCR-diagnostika lastel on mugav ja kahjutu, sest röntgeniuuring on lubatud ainult alates 18-aastastest ja Mantoux'i test põhjustab mõnikord kõrvaltoimeid;
• PCR on väga tundlik analüüs. See võimaldab teil tuvastada Kochi pulgad mükobakterite minimaalse kontsentratsiooniga;
• Erilise polümeraasi ensüümi abil diagnoositakse haigus igal etapil, algusest kuni edasijõudnuni;
• see meetod on efektiivne haiguse kordumise diagnoosimiseks;
• See meetod on läbimurre täpsete diagnooside tegemisel haiguse varases staadiumis. See võimaldab teil alustada ravi võimalikult lühikese ajaga ja hävitada patogeenid, kui neil ei ole veel olnud pöördumatut negatiivset mõju inimese keha elunditele ja süsteemidele.

Kust teha tuberkuloosi PCR-analüüs

Kuigi tuberkuloosi PCR-analüüs on selle haiguse diagnoosimiseks väga tõhus meetod, kasutatakse seda harva. Reeglina on see tuberkuloosi avastamise täiendav meetod ja seda kasutatakse harva. Fakt on see, et see meetod on üsna kallis.

Avalikel kliinikutel ei ole võimalust osta spetsiaalset varustust PCR-analüüsi läbiviimiseks ning valitsus ei näe selle artikli rahastamise mõtet, kuna tuberkuloosi saab diagnoosida muul viisil. Sellist uuringut teostatakse kõige sagedamini erakliinikutes, mis suudavad endale vajaliku varustuse osta.

Meetodi puudused

Kõrge hind ei ole PCRi ainus puudus. Lisaks kõrgetele kuludele on meetodil ka muid puudusi ja puudusi, näiteks:

• Tuberkuloosi PCR annab positiivse tulemuse isegi pärast ravi, kuna see võtab surnud rakke elusateks bakteriteks, seetõttu ei ole see meetod patsiendi kontrolleks sobiv, et kinnitada tema taastumist;
• tuberkuloosi batsillid muteeruvad ja nende DNA modifitseeritakse, mis võib mõjutada tulemuse usaldusväärsust;
• PCR-i vereanalüüse tuberkuloosi kohta teostatakse harva, sest Koch-pulgade olemasolu nendes bioloogilistes vedelikes on äärmiselt raske tuvastada. See on võimalik ainult viimastel etappidel või sepsis. Tavaliselt võetakse patsiendi röga diagnoosimiseks;

Väärib märkimist, et kõige täpsem tulemus on just patsiendi mao sisu kogumine. Kui kahtlustatakse kopsutuberkuloosi, on röga kultuur kõige tõhusam viis haiguse diagnoosimiseks. Kui patsiendil on ekstrapulmonaalne vorm, ei pruugi selles bioloogilises keskkonnas olla baktereid. Luude, liigeste jms tuberkuloosi määramiseks PCR abil on vaja teist bioloogilist vedelikku, näiteks seljaaju vedelikku.

Kuidas on tuberkuloosi PCR

Nagu eelnevalt kirjeldatud, on PCR-i analüüsi põhiolemus patogeeni DNA tuvastamine patsiendi bioloogilises vedelikus polümeraasi reaktsiooni abil. Meetodi peamised etapid:

1. Bioloogilise materjali proovide võtmine. PCR ei ole ainult hemotest - uuritud biomass võib olla sülg, uriin, tserebrospinaalvedelik, bronhide pesemisvedelik, mao sisu, röga.
2. Seejärel eksponeeritakse biomass kõrge temperatuuriga, et hävitada patogeeni DNA struktuur.
3. Seejärel väheneb temperatuur järk-järgult ja hävitatud DNA elemendiga kinnitatakse praimer.
4. Molekulaarse sünteesi tulemuste järgi, mis võtab aega umbes 30 tsüklit, tuvastatakse teatud patogeensete bakterite tüvi või selle puudumine.

See analüüs nõuab head rahastamist, nii et PCRi ei tehta väga sageli. Sellel meetodil ei ole aga võrdset mõju, kui muud diagnostilised valikud on keelatud või hädaolukorras, kui pole aega oodata tulemust.

Kokkuvõte

Kokkuvõttes saame teha järgmised järeldused:

• PCR on väga täpne analüüs, mis suudab tuvastada tuberkuloosi mõni päev pärast nakatumist;
• see analüüs viiakse läbi 3,5 - 5 tunniga, nii et juhul, kui arve läheb kella, on see asendamatu;
• see on ohutu meetod, millel ei ole kõrvaltoimeid;
• Seda kasutatakse siis, kui teised diagnostilised meetodid on näidanud ebajärjekindlaid tulemusi või nende kasutamine on vastunäidustatud.

PCR-i on siiski harva tehtud, kuna tegemist on kallis analüüsiga, mis nõuab erivarustuse paigaldamist. Lisaks ei ole see alati informatiivne, mistõttu eksperdid kasutavad seda meetodit tuberkuloosi avastamiseks.

Tuberkuloosi PCR-analüüs (diagnoos)

Tuberkuloos või tarbimine - üks populaarsemaid 21. sajandi nakkushaigusi. Selle patogeenid on spetsiaalsed mikroobid - Koch pulgad.

Haigus levib mitte ainult kopsude, vaid ka aju, seedimise, liigeste või selgroo, kuseteede süsteemi ja naha suhtes.

Maailma Terviseorganisatsiooni andmetel kannab igal aastal 10 miljonit inimest tuberkuloosi, millest 3 miljonit on surmaga lõppenud.

Eriti kurb olukord SRÜ riikide territooriumil, siin esinevad perioodiliselt tuberkuloossed epideemiad. Venemaad, Kasahstani, Ukrainat juhib kurb reiting selle nakkuse leviku kohta.

Infektsioon on kergesti levitav õhus olevate tilkade kaudu või seedetrakti kaudu, mõjutab elutähtsaid organeid ja suudab ka kiiresti kohaneda polümeersete ravimite ja keemiaraviga.

Tuberkuloosi eduka ravi üks peamisi tegureid on nakkuse õigeaegne avastamine.

Diagnostilised meetodid

Inimkond on leiutanud mitmeid meetodeid ohtliku haiguse äratundmiseks. Tuberkuloosi diagnoos on jagatud instrumentaalseks ja laboratoorseks.

Esimesel juhul oli tuberkuloosi vereanalüüs, samuti röga, uriin.

Teine rühm on uuring, milles kasutatakse röntgen- ja endoskoopiat. Tuberkuloosi diagnoosimise instrumentaalsed meetodid on omakorda kiirgus ja kirurgiline.

Kiiritusmeetodid haiguse leidmiseks

• Fluorograafia on meetod, mis võimaldab diagnoosida iga SRÜ elanikule tuttavat haigust. Röntgenkiirte abil uuritakse kopse ja lümfisõlmi.
• Rindkere röntgen - sarnane fluorograafiale, kuid parem meetod nakkuse avastamiseks. Pilt saadakse üksikasjalikumalt ja kahes projektsioonis, kuid see protseduur on umbes kuus korda kallim. Tavaliselt kasutatakse seda pärast tõsiseid kahtlusi haiguse ilmnemisel.
• Kompuutertomograafia viiakse läbi täiendava diagnoosina, mida kasutatakse ka pärast head põhjust infektsiooni esinemiseks.

Kirurgilised diagnoosimeetodid hõlmavad bronhide endoskoopiat, samuti mediastinoskoopiat ja torakokoskoopiat.

Esimene meetod on kopsupuude uurimine selle organi "sondi" abil. Ülejäänud kaks meetodit võimaldavad uurida kopsupealset osa rindkere punkteerimisega.

Kõik kolm meetodit on tõsine kirurgiline sekkumine ja neid kasutatakse kõige sagedamini haiguse progresseerumise protsessis.

Laborikatsed hõlmavad järgmist:

• Tubutsi bacilluse röga analüüs.
• Mikroskoopiline uurimine.
• Tuberkuloosi PCR-diagnoos

Mis on PCR diagnoos?

Infektsioonide spetsialistide üheks kõige arenenumaks diagnoosimise meetodiks nimetatakse polümeraasi ahelreaktsiooni.

Selle meetodi töötas välja tuntud USA teadlane Carrie Mullis 1983. aastal, mille eest ta Nobeli preemia võitis.

PCR analüüs on DNA osakeste eraldamine röga, vere, tserebrospinaalvedeliku, roojast jne. nende järgneva biosünteesi jaoks.

Kompleksse molekulaarse geneetilise uuringu abil määratakse kindlaks patsiendi kehas olevate mikroobide olemus.

Selline tuberkuloosi analüüs viiakse läbi mitmel etapil:

• Esiteks võetakse bioloogilised proovid. Materjalid paigutatakse spetsiaalsetesse konteineritesse ja saadetakse laborisse.
• Uurimiskeskuses soojendatakse analüüse 97 kraadini. See võimaldab hävitada mitmetest ahelatest koosneva mikroorganismide DNA genoomi struktuuri.
• Temperatuur langetatakse spetsiaalselt nii, et praimerid (DNA osalejad, kellest biosünteesiprotsess algab) võivad ühenduda mis tahes desoksüribonukleiinhappe ahelaga.
• Seejärel viiakse läbi detekteerimiseks vajalike molekulide biosüntees.

Pärast 25–30 korduvat tsüklit laboriuuringute protsessis on arstidel võimalus tuvastada, kas patsiendi kehas on nakkuslikke mikroorganisme või mitte.

Eelised ja puudused

Tuberkuloosi PCR on kõige kaasaegsem diagnostikameetod. Meetod võimaldab nakkuse avastamist mis tahes etapis suure usaldusväärsusega. Kasu:

• Kiirus - uuring ei kesta rohkem kui viis tundi. Tuberkuloosi mikroobide testi tulemused on leitud 24 tunni jooksul.
• Ohutus - PCR meetodil ei ole vanuse vastunäidustusi.
• Õigeaegsus - see meetod võimaldab teil tuvastada tuberkuloosi nendel etappidel, kui haigusel ei ole sümptomeid.
• Kõrge täpsus - kui analüüsidel on vaid vähesed mikroorganismid, leitakse need kasutades polümeraasi ahelreaktsiooni. Samuti võimaldab see meetod tuberkuloosi põhjustajaid kergesti tuvastada.
• Universaalsus - diagnostikat kasutatakse mitte ainult tarbimise avastamiseks, vaid ka muudeks haigusteks, nagu klamüüdia, gonorröa jne.

Hoolimata paljudest eelistest on selle tehnika kasutamine siseriiklikus meditsiinipraktikas pigem erand kui reegel. Sellel on mitmeid põhjuseid.

Selle meetodi puudused on järgmised:

• Uuringu kõrge hind.
• Meetod ei sobi neile, kes on läbinud ravi, kuna surnud Kochi bakterite esinemine võib põhjustada valepositiivset tulemust.
• Nakkuslike mikroorganismide mutatsiooni korral ei saa nende genoomi tuvastada vale järeldusega.
• Oluline on valida õige avastuskeskkond. Näiteks on tuberkuloosi PCR-i vereanalüüsi tulemus (lahjenduse sisestamine) närvisüsteemi nakatumise korral negatiivne.
• Seda meetodit ei ole alati võimalik rakendada kopsukahjustustega patsientidele.

Lisaks nõuab tuberkuloosi selline analüüs kaasaegseid seadmeid, mida 90% haiglatest ei ole. SRÜs võib sellist analüüsi teha Invitro kliinikute võrgustik.

Analüüsi tingimused

Soovitused sellisele tuberkuloosikatsele alluvatele patsientidele varieeruvad sõltuvalt analüüsi liigist.

PCR-i vere võtmiseks on vaja alkoholi ja rasvaste toitude välistamiseks kahe tunni jooksul hoiduda suitsetamisest üks tund enne protseduuri.

Samuti soovitatakse hoiduda füüsilisest pingutusest, samuti on võimatu võtta tühja kõhuga tuberkuloosi vere.

Kui te võtate tampooni suust ja ninaõõnest, ei saa te 2-4 tundi enne protseduuri süüa, vastasel juhul ei ole see informatiivne. Samuti ei tohi juua alkoholi.

Täpse lugemise jaoks on keelatud suitsetada varem kui tund enne protseduuri. Eelõhtul hoiduge hammaste harjatest ja pihustite ja suupihustite kasutamisest.

Kui kahtlustate urogenitaalsüsteemi tuberkuloosi, peaks patsient 2-3 päeva enne sünnitust välistama soo, 2–3 tundi enne protseduuri, ärge minge tualetti „väikesel viisil”. Suguelundeid tuleb pesta puhta veega ilma erivahenditeta.

Naistel soovitatakse mitte kasutada vaginaalset tabletti, küünlaid, palle ega ka kriitilistel päevadel katsetamist.

5 päeva enne sünnitust on tulemuseks vajalik kolposkopia protseduuri ja transvaginaalse ultraheli protseduuri lõpetamine,

Millal kasutatakse PCR-diagnostikat?

Mitte iga kliinikus pole nii keeruline diagnoos, kuid arstid kasutavad üha enam selliseid uurimismeetodeid. Tavaliselt viiakse selline analüüs läbi erilistes olukordades.

• Kahtlike tulemuste korral manta võib kasutada tuberkuloosi vereanalüüsi.
• Juhtudel, kui patsient on nakatunud isikuga kokku puutunud, ei saa diagnoosi täpselt kindlaks määrata raviarst.
• Erakorralise operatsiooni korral, kui on vaja lühikese aja jooksul teada saada, kas patsiendil on see infektsioon.
• Kui patsient on rase, kui teised uuringumeetodid ei ole vastsündinule piisavalt ohutud.

Tuleb märkida, et seda diagnoosi soovitatakse lastele ohutuse tõttu.

Kui üliõpilasel on vastunäidustused tuberkuliiniproovi vastu, võib ta PCR-i abil võtta tuberkuloosi asemel vereanalüüsi.

Tuberkuloosi PCR analüüs

Selle haiguse valdkonnas on meditsiiniuuringute seas kõige populaarsem tuberkuloosi PCR-analüüs.

Aga kuidas ennast ja oma lähedasi sellest kohutavast haigusest hoiatada? Kuidas teha vajalikud testid PCR-iga?

Tuberkuloosi sümptomid ja selle ennetamine

Eksperdid ütlevad, et umbes 30% kogu elanikkonnast kannatab tuberkuloosi all.

Suurim protsent haigusest on arenenud arenemata riikides. See esineb kõige sagedamini inimeste immuunsuse vähenemise tagajärjel.

Haigus on üks vanimaid. Seda haigust võib leida aju vooderdusest, seedetraktist, liigestest ja selgroost, kuseteede süsteemis ja väikestes piirkondades inimese nahal.

Eksperdid määravad kõige kergemini kahjustatud naha. Kohapeal on väikesed tihendid, mis aja jooksul suurenevad, lõhkevad valkja vedelikuga.

Tuberkuloosi põhjustaja võib kõige sagedamini haige või aevastamise ajal haige inimesega rääkides tõusta. Tavaliselt kulgeb haigus ilma sümptomideta või on avatud kujul, kuid tuberkuloosi PCR-diagnoos võimaldab seda avastada varases staadiumis ja hädaolukorras.

Haiguse sümptomid: pikaajaline märgne köha, palavik, külmavärinad, liigne higistamine öösel, järsk kaalukaotus, väsimus ja nõrkus.

Haiguse avatud vorm on kõige ohtlikum. Tuberkuloosi põdev isik on võimeline terveid inimesi nakatama.

Kopsuhaiguse kõige olulisem sümptom on hemoptüüs. See esineb haiguse mis tahes vormis.

Mõnel juhul võib see põhjustada inimese kopsude verejooksu. See on väga ohtlik ja nõuab kiiret meditsiinilist sekkumist.

Tuberkuloosi ennetamiseks ja tunnustamiseks määravad eksperdid: proovi - tuberkuliiniproovi, bioloogilise materjali uurimist, fluorograafiat, röntgenikiirgust ja vereanalüüsi, röga või sülje.

Haiguse diagnoos

Haiguse parem diagnoosimine - see on õige ja ravi alguses. Enamikul juhtudel ei ole tavapärastel patogeenide avastamise meetoditel alati mõju ja need on juba aegunud.

Kõige olulisem viis kopsuhaiguse tuvastamiseks ja diagnoosimiseks on arstliku läbivaatuse testid. Tavaliselt kasutage PCR diagnostikat. 1983. aastal avastas selle uuringu Ameerika biokeemik Mullis.

Pulmonaalse tuberkuloosiga patsiendi test viiakse läbi ainult erijuhtudel, kui diagnoosi on raske kindlaks teha või haigust ei ole võimalik instrumentaalselt tuvastada.

Polümeraasi ahelreaktsioon on usaldusväärne PCR meetod. See analüüs võimaldab määrata, kui palju on see veres, uriinis ja seljaaju vedelikus. Selline tervisekontroll on kõige ohutum.

PCR analüüs annab tulemuseks 100%.

See on kõrge tundlikkusega, mis aitab ära tunda haigust esimest korda pärast nakatumist, enne kui haiguse sümptomid ilmuvad. See analüüsimeetod annab tulemuse mõne tunni jooksul pärast bioloogilise materjali tarnimist. Selle analüüsi külvamine toimub kolm korda, kuid haigestunud mao aspiratsioon viiakse läbi ainult haiglas.

Tulemuste kindlaksmääramiseks töötati välja kolm kriteeriumi: kõrge täpsus, tundlikkus kuni 90%, spetsiifilisus.

PCR-testi kasutatakse mõnel juhul:

1. diagnoosida kopsu tuberkuloosi;
2. määrata haiguse allikas;
3. ekstrapulmonaalse lokaliseerimise määratlus;
4. kordumise diagnoos.

Hinnake tulemust ja määrake õige ravi, saab ainult spetsialist. Tuberkuloosi avastamiseks on väga oluline määrata õige ravikava, on vaja teha test patogeeni vastuvõtlikkuse suhtes tuberkuloosivastaste seadmetega.

Mitmed tuberkuloosi meditsiinilised testid

Te võite võtta vajaliku analüüsi kahel viisil: võtta isikult verd või sülge või võtta röga.

PCR-iga tehtud vereanalüüsid võivad olla kahte tüüpi: ELISA ja PCR. Selline uuring aitab jälgida ravi tõhusust.

ELISA aitab leida antikehi inimkehas, mis on resistentne tuberkuloosi mikroobidele. See uuring viiakse läbi üks kord päevas. Peamine puudus on selle madal tundlikkus, mis võimaldab määrata ainult madala nakatumistase.

Kõige populaarsem ja tõhusam uurimus on mükobakterite tuberkuloosi analüüs. Tema juures võivad arstid kergesti leida inimese veres bakterite DNA. Seda meetodit kasutatakse ka bakterite arvu määramiseks, patsiendi ravi kontrollimiseks, varajase kordumise avastamiseks.

PCR-i sülg on üks kõige arenenumaid uurimismeetodeid. Selline analüüs aitab tuvastada süljes nakkuslikke baktereid. PCR kasutamine suurendab kahjulike mikroobide DNA fragmentide arvu.

Kultuurimeetod on ette nähtud inimese röga uurimiseks, et tuvastada mikroobid.

PCR testimise ettevalmistamine

Tähelepanu, vajate PCR-i jaoks sülje õiget valmistamist. Kui kõiki ettekirjutusi ei järgita, võib analüüs olla valepositiivne.

Enne testi sooritamist on keelatud suitsetada, süüa toitu ja ravimeid ning tarbida alkoholi 12 tunni jooksul. Hammaste harjamine on keelatud, loputusvahendit, suu värskendajat ja hambaniiti ei saa kasutada.

Keelatud on kasutada huulepulka ja sõlmida intiimseid suhteid. Lubatud suu loputada lihtsa keedetud veega;

See uuring aitab tuvastada: herpes, klamüüdia, tuberkuloos, kopsupõletiku patogeenid, onkoviirused, barolleoos, mononukleoos, HIV, igasugune hepatiit, punetised.

Mükobakterite analüüs viiakse peamiselt läbi vastuolulistel juhtudel, nimelt kui on raske diagnoosida või kui enne operatsiooni alustamist on haiguse tuvastamiseks tuberkuloosiga patsiendiga kokku puutunud. Kasutatakse raseda naise uurimiseks, kuna see meetod on emale ja lootele kõige ohutum.

Mõnikord viiakse analüüs läbi erakliinikus, sest patsient ei järginud testimise reegleid, kuid samal ajal on ta mures kõigi sümptomite pärast. Analüüsi saab teha siis, kui spetsialistid ei ole pärast Mantoux'i testi läbiviimist kindel või kui patsient on laps.

Tuberkuloosi määramise meditsiiniliste testide eelised ja puudused

PCR on kõige populaarsem ja tõhusam viis haiguse kindlakstegemiseks.

Selle suurim erinevus võrreldes teiste uuringutega on kiire ja täpne tulemus.

Selle arstliku läbivaatuse eeliseks on, et seda saab teha uroloogiliste, günekoloogiliste, onkoloogiliste, nakkuslike, hematoloogiliste, kopsu-, gastroenteroloogiliste ja muude uuringute puhul.

Sellise meditsiiniuuringu peamine eelis on see, et vereanalüüsid, röga ja sülg on valmis lühikese aja jooksul (haiguse avastamiseks kulub 5 tundi). Selline arstlik läbivaatus võimaldab teha katseid, kui teatud haiguse uurimise meetodid on keelatud või kättesaamatud. Suurepärane inimeste kordumise avastamiseks.

Tänu sellele analüüsile sai võimalikuks teha uuringuid mis tahes bioloogilise keskkonna jaoks. Lastel on lubatud materjali võtta. PCR võimaldab tuvastada haigustekitajat haiguse mis tahes staadiumis. Suure tundlikkuse tõttu võib mikroobid leida isegi siis, kui esinevad vaid mõned bakterid.

PCR meetod laiendab selle võimalusi. Seda kasutatakse ka isaduse määramiseks, uute geenide, mutatsioonide, DNA elementide ületamiseks jne.

Selle uuringu puudused on kallis uuringumeetod.

Pärast ravi on vereanalüüsil võimalik näidata elusate või surnud patogeenide esinemist väikestes kogustes, pärast tervisekontrolli, see annab positiivse tulemuse.

Bakterid ja mikroobid võivad läbida mutatsiooni, mille järel PCR ei suuda neid identifitseerida ja identifitseerida, mistõttu võib ainult spetsialist määrata nõutava keskkonna uuringu, vastasel juhul on selline arstlik läbivaatus ebaefektiivne.

Pärast katsetamist on negatiivne tulemus, kuid see ei välista võimalust, et inimene nakatub tuberkuloosiga. Selline meditsiiniline läbivaatus viiakse läbi raske kopsuhaigusega patsientidel, kui muud uuringud ei anna täpseid tulemusi. PCR on kasulik inimestele, kellel on kopsu- ja ekstrapulmonaalne tuberkuloos.

Kahjuks on tuberkuloosi patogeenide avastamiseks mõeldud meditsiinitehnika väga kallis.

Avalikud haiglad ja kliinikud ei saa seda endale lubada, kuid tasulised kliinikud võtavad patsiendi teste ja annavad valmis tulemusi lühikese aja jooksul.

Tuberkuloosi PCR-diagnoos

Tuberkuloos on spetsiifiline nakkus, selle fookus võib olla inimkudedes juba aastaid ja seejärel mitme kuu jooksul. See on krooniline haigus, mille optimaalne ravirežiim on raske valida. Selle üheks põhjuseks on hiline diagnoosimine, kui mükobakterid on inimorganismis juba paljude ravimitega kohanenud.

Millised on kaasaegsed diagnoosimeetodid? PCR diagnostika - mis see on? Kuidas see uurimus tehakse? Millistel juhtudel on selle meetodiga diagnoositud tuberkuloos ja milline on selle olemus?

Mis on PCR diagnostika

See on üks kaasaegsemaid meetodeid mitte ainult haiguste, vaid ka bioloogilise materjali avastamiseks. PCR diagnostika leiutati suhteliselt hiljuti. Umbes 30 aastat tagasi 1983. aastal pakkus Ameerika biokeemik Carey Banks Mullis välja ühe lühikese segmendi mikroorganismide bioloogilise materjali kompleksse taastamiskava. Tänu avastusele pälvis teadlane kõrgeima auhinna - Nobeli preemia.

Mis see on - nakkuste PCR-diagnoos? Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on viirushaiguste avastamise diagnoos, mis põhineb geenitehnoloogia meetoditel. Seda kasutatakse laialdaselt meditsiinilise mikrobioloogia, immunoloogia ja viroloogia valdkonnas. Meetod on universaalne ja aitab teha diagnoosi väikese koguse materjaliga. Infektsiooni võib sõna otseses mõttes tuvastada esimestel nakatumise tundidel kaua enne haiguse esimeste sümptomite ilmnemist.

Meetod seisneb haige inimeselt materjali saamises mitte patogeenis, vaid genoomi fragmentides (DNA osakesed), selle biosünteesis ja sellele järgneva määramisega, milline mikroorganismide klass on saadud geneetilise materjali molekulide geneetiliste meetodite abil.

Hoolimata asjaolust, et see on keeruline protsess, kulub palju vähem aega kui paljud bioloogilised meetodid nakkusetekitajate avastamiseks. Mõne tunni jooksul võib mikroorganismi PCR abil tuvastada. Selleks ei ole vaja seda keskkonnast eraldada (veri, tserebrospinaalvedelik, röga) ja kasvatada seda pikka aega kunstlikel toitainetel. Piisab, et uuritava materjali juures on nakkusetekitaja DNA ahela väike fragment.

Reaktsiooni aluseks on kunstlikes tingimustes (in vitro) võimalus nakkusetekitaja nukleiinhappemolekulide sünteesi loomiseks.

Mida on vaja PCRi jaoks?

1. Krundid on DNA segmendid, millest algab biosüntees või loomine.
2. Nukleotiidid või komplekssed ühendid, mis on DNA või RNA molekuli aluseks.
3. Polümeraasi ahelreaktsioon on polümeraasi olemasolu korral võimatu, mis on PCR-i kiirendav ensüüm.

PCR-diagnostika etapid

Kuidas toimub molekulaarne diagnoos PCR abil? Menetlus on lihtne ja võtab aega, võttes arvesse materjali kogumist.

1. Enne uuringu alustamist võtavad nad vajaliku bioloogilise materjali - see on bronhide pesuvesi, veri, mao sisu, röga. Bioloogilise materjali tüüp sõltub kahtlustatavatest patogeenidest.
2. Kahest ahelast koosneva DNA esmase struktuuri denaturatsioon või hävimine. Selle etapi põhieesmärk on eraldada kaks ahelat kõrge temperatuuri mõjul (maksimum on 98 ° C, mis kestab mitte rohkem kui kaks minutit).
3. PCR järgmises etapis, mida nimetatakse anniilimiseks, vähendatakse temperatuuri mitu kraadi, nii et praimer seondub DNA ahelaga.
4. Pikenemine, mille jooksul toimub soovitud molekulide süntees otse.

Selle tulemusena saavad ainult 25–30 sellist tsüklit vajaliku arvu koopiaid mikroorganismi DNA-st, mida on lihtne ära tunda.

Kas PCR nõuab tuberkuloosi diagnoosi?

PCR-i ei ole võimalik teostada absoluutselt kõikidel inimestel, kellel on kahtlustatav tuberkuloos, kuna see meetod nõuab kalleid seadmeid. Mitte kõik avalikud kliinikud ei saa seda endale lubada. Lisaks juhtus nii, et tavalised meetodid nakkuse diagnoosimiseks enamikul juhtudel õigustavad ka ennast.

Nende hulka kuuluvad:

• patsiendiuuring, ajaloo võtmine;
• isiku täielik läbivaatus;
• Mantoux tuberkuliiniproovi kasutades;
• radiograafia või fluorograafia;
• vajadusel arvuti diagnostika;
• mikrobioloogiliste uuringute meetodid: mustri mikroskoopia ja röga bakterioloogiline uurimine.

Tuberkuloosi PCR viiakse läbi erijuhtudel, kui on raske diagnoosida või muid instrumentaalseid meetodeid ei ole võimalik teostada.

Vaatamata diagnostiliste meetodite rohkusele kasvab tuberkuloosi esinemissagedus jätkuvalt. Praegu ei ole mitte ainult kasv, vaid ka muud omadused:

• haigus esineb sageli raskes vormis;
• surmaga lõppenud juhtude arv suureneb;
• haiguse diagnoositud vormid on üha resistentsemad tänapäevase keemiaravi suhtes.

Inimeste vastumeelsus igal aastal läbi viia tavapäraseid arstlikke läbivaatusi, vaktsineerimise tagasilükkamine viib tuberkuloosi levikuni. Sellistes tingimustes on vaja kiireid, informatiivseid ja tõhusaid uurimismeetodeid, mis peaksid olema kättesaadavad lastele ja täiskasvanutele. Kõik ülaltoodud diagnostikameetodid on palju halvemad kui PCR.

Tuberkuloosi diagnoosimise eelised PCR-iga

See uuring, kuigi uus, on end hästi tõestanud, eriti vastuolulistel juhtudel, kus on mitmel põhjusel võimatu diagnoosida.

Tänu PCR-ile on katsematerjalis tuberkuloosi põhjustaja tuvastamine palju lihtsam.

PCR-i diagnostika eelised on järgmised.

1. See on kiire analüüs. DNA molekuli väikest fragmenti saab kasutada vaid mõne tunni (umbes viie) tunni jooksul diagnoosimiseks, mida kasutatakse hädaolukordades edukalt, kui näiteks enne operatsiooni on vaja kindlaks teha, kas inimene on haigestunud tuberkuloosiga.
2. PCR-analüüs on lubatud juhul, kui teised meetodid ei ole kättesaadavad või keelatud (kopsu tuberkuloosi avastamiseks tuleb mõnikord võtta mitu radiograafilist pilti, mis on suur kiirgusdoos).
3. PCR abil uuritakse mistahes bioloogilist keskkonda patogeeni olemasolu selles. Näiteks võite teha uuringuid tserebrospinaalvedeliku kohta, kui kahtlustatakse tuberkuloosse meningiidi tekkimist.
4. Laste nakkushaiguste lubatud PCR-diagnoos, sest meetod on ohutu.
5. Võimaldab tuvastada patogeeni haiguse mis tahes staadiumis.
6. PCR kõrge tundlikkus võimaldab tuvastada Mycobacterium tuberculosis, isegi kui bioloogilises materjalis on vaid mõned mikroorganismid.
7. Haiguse kordumise diagnoosimiseks on hea teha.

Lõppude lõpuks tundub lugenud PCR peaaegu täiuslik diagnostiline meetod, mis peaks tegema kõikidele tuberkuloosi kahtluse. Kuid siin on ka puudusi, neid tuleb arvesse võtta.

PCRi puudused tuberkuloosi diagnoosimisel

Meie aja jooksul on selline diagnostika tavalisest harvem. Ja selleks on põhjus.

1. See on kallis uurimismeetod. Paljudes kliinikutes puuduvad PCR-i seadmed selle kõrge maksumuse tõttu, kuid analüüse saab veel teha tasulistes laborites.
2. Vahetult pärast töötlemist võivad inimkehas olla surnud mükobakterid või väikeses koguses elamine (tulemus on positiivne PCR-diagnostika ajal), mistõttu meetod ei ole sel ajal usaldusväärne, seda ei ole mõistlik seda teha.
3. Mükobakterite mutatsioonid põhjustavad ebaefektiivset PCR-i - normaalset DNA ahela järjestust ei ole võimalik sünteesida.
4. Uuringu jaoks on vaja valida õige keskkond, verd võetakse ainult siis, kui kahtlustatakse nakatumist (sepsis), närvisüsteemi organite tuberkuloosi korral ei ole vaja rögaid võtta. Sellisel juhul ei suuda PCR patogeeni tuvastada ja diagnoos on informatiivne.

Indikaatorid tuberkuloosi tuvastamiseks PCR analüüsi abil

Tuberkuloosi PCR-diagnoosimine toimub kõige sagedamini vastuolulistel juhtudel. Millal suunavad arstid selle uuringu?

1. Kui diagnoosi on raske teha tavapäraste olemasolevate meetodite abil, kuid tuberkuloosiga patsiendil oli kokkupuude.
2. Juhul, kui isikut ei saa kliinikusse tuberkuloosi rutiinsete katsete tegemiseks üle anda, on teda kergem uurida PCR-i abil, sest testi röga võib toimuda purki ja diagnoos kinnitatakse mõne tunni jooksul.
3. Kui inimesel on hädaabioperatsioon ja on hädavajalik teada saada, kas ta on haigestunud tuberkuloosiga.
4. Vajadusel on rasedatel ka PCR-i abil paremini uurida tuberkuloosi, sest meetod on ohutu.
5. Tasulisel alusel on igaüks, kellel ei ole diagnoositud tuberkuloosi, kinnitatud bakterioloogiliste meetodite ja fluoroskoopia abil. See juhtub siis, kui kopsudes esinev kahjustus ei ole otseses pildis nähtav ning uuringu jaoks röga väljaandmisel ei suutnud inimene järgida materjali õige kogumise soovitusi. Sel juhul on inimene mures kõikide kopsutuberkuloosile iseloomulike sümptomite pärast.
6. Kui on kahtlusi Mantoux'i testi tulemuste suhtes.
7. Lastel on soovitatav teha tuberkuloosi PCR-diagnoos. Protseduur on ohutu, ei tekita täiendavat kiirgusega kokkupuutumist ja on efektiivne haiguse diagnoosimiseks raske.

Tuberkuloosi õigeaegne diagnoosimine on võtmeks nõuetekohaselt määratud ravile ja haiguse leviku vähendamisele. Sageli ei ole tuttavad haiguse tuvastamise meetodid alati tõhusad. Seetõttu on PCR tänapäeval üks kõige usaldusväärsemaid ja ohutumaid viise nakkuse avastamiseks selle arengu varases staadiumis.