Mis on tuberkuloosi PCR-analüüs

Sinusiit

Innovatiivne meetod mikroorganismide avastamiseks, mille leiutas teadlane Cary Mullis eelmise sajandi lõpus - PCR analüüs. Ta sai oma kirjutiste eest Nobeli preemia. Seda protsessi nimetatakse täielikult polümeraasi ahelreaktsiooniks. See koosneb mikroorganismi tüübi taastamisest antud biomaterjalis, kasutades lühikesi DNA fragmente. See võimaldab teil avastada infektsiooni varases staadiumis ja alustada ravi kohe, ilma et see põhjustaks tõsiseid sümptomeid ja tüsistusi.

Mis on analüüs

Diagnoosimine PCR abil on saada patogeenset DNA segmenti bioloogilisest materjalist ja viia need õigesse ahelasse. See võimaldab identifitseerida mikroorganismi, millesse rakud kuuluvad.

Menetlus viiakse läbi kolmes etapis:

  1. Bioloogilise materjali kogumine.
  2. DNA identifitseerimine ja joondamine.
  3. Infektsiooni tunnustamine.

See uuring nõuab spetsiaalseid meditsiiniseadmeid - võimendajat. See on varustatud kaameraga, kus uuritud materjal suhtleb kõrge temperatuuri ja keemiliste ensüümidega. Väljumisel on laboritehnikul pikaajaline nakkusetekitaja DNA ahel, kui inimorganismis on üks.

Kuidas valmistuda diagnoosimiseks

PCR-analüüs on keeruline geenitehnoloogia protsess, mis nõuab nii laboratooriumi kui ka patsientide täpsust ja tõsidust. Analüüsi tulemuste õigsuses mängib suurt rolli protseduuri ettevalmistamine, st materjali õige kogumine.

Peamised haiguse allikad on järgmised:

Võib kasutada ka muid võimalusi, vajaduse korral võetakse vedelikke analüüsiks erinevatelt organitelt.

Patsiendi jaoks on olemas teatud reeglid, mida tuleb enne protseduuri järgida. Vereanalüüsi korral on keelatud 8 tundi enne kogumist:

  • süüa toitu;
  • suitsetada;
  • juua alkohoolseid jooke;
  • võtta ravimeid sees.

Õhtul, enne röga kogumist, on ravim purjus ja hõlbustab röstimist. Hommikul koguge materjal pärast suuõõne hoolikat hügieeni.

Uriini kogutakse steriilses purki hommikul tühja kõhuga, pärast pesemist, enne mis tahes ravimi võtmist.

Kui inimene võtab antibiootikume, tuleb polümeraasi ahelreaktsiooni analüüs edasi lükata, vastasel juhul ei ole PCR tulemus usaldusväärne. Röga või veri tuleb annetada kaks nädalat pärast ravikuuri lõppu.

Kuidas bakterite identifitseerimise protsess

Lühidalt öeldes on protsess DNA osa isoleerimine. Kaasaegsete geenitehnoloogia meetodite kasutamine võimaldab meil määrata mikroorganismi tüüpi. Lisaks on analüüsi materjalil väike kogus.

Tehniliselt on see väga keeruline menetlus, kuid see võtab vähem aega kui klassikalised bakterioloogilised uuringud. Patogeenid ei pea biomaterjalist eraldama, neid ei ole vaja mitu nädalat kasvatada. Tarnimise päeval saab patsient juba oma analüüsi tulemust teada.

Kogu PCR protsess toimub järk-järgult:

  1. Töö on käimas DNA esmase vormiga, mis kõrgel temperatuuril, peaaegu 100 kraadi, on jagatud kaheks ahelaks.
  2. Temperatuur langeb, niidid on ühendatud nukleiinhappefragmentidega - praimeriga.
  3. Pikenemine toimub - molekulaarse struktuuri süntees.

Kogu seanss koosneb umbes kolmekümnest sellisest protseduurist, kordades tsüklit ahelreaktsioonina. See on vajalik selliste rakkude arvu loomiseks, milles saadud bakterid muutuvad äratuntavaks.

Uuringu kokkuvõte

PCR-i tulemuse kirjeldus (polümeraasi ahelreaktsioon) annab TB-arstile, see on lihtne või kasutatav. Esimesel juhul sisaldab kirjeldus ainult informatsiooni Kochi pulgade olemasolu või puudumise kohta. Kui dekodeerimine on üksikasjalik, saate sellest teada haiguse ulatuse, selle fookuse. Nende kriteeriumide kohaselt on igal juhul võimalik määrata tuberkuloosi kõige sobivam ravi.

Ketireaktsiooni polümeraasi analüüs ei erista elavaid ja surnud patogeene ning räägib ainult nende esinemisest. Seetõttu on otstarbekas läbida teine ​​tuberkuloosi test ainult 3-4 nädalat pärast arsti poolt määratud ravi läbimist.

Kui tulemus on positiivne, siis tehakse kokkuvõte „Mycobacterium tuberculosis”. Negatiivse tulemuse korral on bakterite bioloogilise nimetuse kõrval märk "ei leitud". Analüüsid võivad olla valepositiivsed. See juhtub harva - PCR-uuringute tegemise või elujõuliste mikroorganismide juuresoleku tehnika rikkumise korral. Lõplikku järeldust haiguse kohta saab teha ainult tuberkuloosi arst.

Meetodi eelised

Tuberkuloosi PCR-diagnostika on mitmel põhjusel populaarseks saanud. Sellel on palju eeliseid, sealhulgas:

  1. Uuringute täpsus. Tehnoloogia analüüsimisel on võimalik tuvastada baktereid, isegi kui need on väikestes kogustes.
  2. Kiire tulemus. Kogu protsess alates materjali kogumisest lõpetamiseni lõpeb umbes 5 tundi. Võrreldes külviga peab ta ootama kuni mitu nädalat.
  3. Täielik ohutus inimesele, erinevalt fluorograafiast selle kiirgusega.
  4. Kasutatakse mis tahes vedelat biomaterjali. PCR-i rakendamiseks kopsutuberkuloosis annab röga kõige täpsemat teavet, tuberkuloosse meningiidi korral võetakse seljaaju proov. Vereanalüüs aitab tuvastada kohalikke nakkuste fookuseid.
  5. Testitakse bakterite antibiootikumide tundlikkust. See võimaldab teil määrata õige ravi.
  6. Varane diagnoosimine. Enne haiguse sümptomite ilmnemist saate teada haiguse olemasolust.

Lisaks positiivsetele aspektidele on ka puudusi. Peamine on hind. PCR analüüs ei ole odav, mis on seotud kallite seadmete kasutamisega. Teiseks puuduseks on vajadus oodata aega, et pärast tuberkuloosi ravikuuri uuesti läbi vaadata. Mõnikord on testi tulemus vale-positiivne. See juhtub bakterite mutatsiooni tõttu.

Kui PCR on vajalik

Pulmonaalse tuberkuloosi PCR-il ei ole vastunäidustusi ja see on täiesti ohutu. Seetõttu on teatud olukordi ja haigusi, kui see on ainus teadustöö võimalus.

Nende hulka kuuluvad:

  • rasedus;
  • kokkupuude tuberkuloosiga patsiendiga;
  • raskused kopsuhaiguse diagnoosi määramisel;
  • uuring enne operatsiooni;
  • allergiline reaktsioon;
  • HIV-nakkus;
  • noor.

PCR meetodit saab kasutada phtisioloogias välja antud suunas, samuti lastearst, arst või pulmonoloog.

Mis võib asendada tuberkuloosi PCR-diagnoosi

Muud liiki uuringud ei ole aegunud, vaid neid kasutatakse jätkuvalt. Neid kasutatakse juhtudel, kui tuberkuloosi korral ei ole võimalik teostada PCR-i. Lisaks ei ole kaasaegne meetod ideaalne, mõnikord on selle näitajad küsitletud ja vajavad uuesti kontrollimist.

Järgmised meetodid aitavad kindlaks määrata tuberkuloosi esinemist inimesel:

  • tuberkuliini diagnoos (Mantoux);
  • fluorograafia;
  • taimestiku bioloogilise materjali katsetamine;
  • kopsude röntgen.

Need uuringud on tasuta ja kõigile kättesaadavad. Kuid neil on oma puudused:

  • Tuberkuloosi test põhjustab allergiat. Vastunäidustatud nahahaiguste korral.
  • Röntgeniuuringutega kaasneb kiirgus, mida ei saa kasutada lastel, immuunpuudulikkusega ja rasedatel naistel.
  • Bakterioloogilised analüüsid võtavad palju rohkem aega, tulemust võib oodata kuni kuu.

Alternatiivid ei garanteeri 100-protsendilist korrektset järeldust. Neid kasutatakse kõige sagedamini ennetavatel eesmärkidel. Tuberkuloosi diagnoosimine PCR-iga annab kõige usaldusväärsema teabe. Võimaluse korral on parem seda kasutada.

Tuberkuloosi eripärad lastel ja vajadus PCR-i järele

Laps peab olema haiguse eest eriti kaitstud - tuberkuloosi infektsioon võib põhjustada kehale tõsist kahju, mille immuunsus ei ole veel täielikult kujunenud.

Pärast Kochi võlukeppi sisenemist laste organismi, läbib haiguse areng järgmisi etappe:

  • Varjatud. See kestab kuni aasta ilma sümptomeid välja andmata.
  • Mürgistus. Mõjutab üldist tervist. Ilmub nõrkus, apaatia, isutus, unisus ja vähenenud jõudlus. Pidevalt veidi kõrgenenud temperatuur.
  • Haiguse esmane vorm. Tuberkuloos on lokaliseeritud, moodustades haiguse fookuse. Lapsel on köha, õhupuudus, peavalu, lümfisõlmede paistetus.
  • Tuberkulaarne bronhiadeniit. Sümptomid on valu abaluudes, köha koos erineva helitugevusega, vilistav hingamine.

Tavaliselt süstitakse tuberkuliini infektsiooni tuvastamiseks lapse naha all. Kui seda tüüpi uuring on vastunäidustatud, on tuberkuloosi PCR-i diagnoosimiseks hädavajalik. Lapsed võtavad tavaliselt vereanalüüsi, kuid vajadusel kogutakse röga. Tuberkuloosi esinemise kahtluse korral tehakse täiendavaid uuringuid, et tagada positiivne tulemus ja kohe alustada ravi varajases staadiumis, vältides haiguse arengut.

Kaasaegsed uurimismeetodid on alati kiiremad ja usaldusväärsemad. Kahju, et selliste testide tegemise tõttu on kallis varustus olemas mitte kõigis meditsiiniasutustes ja -kohtades. Milline viis eksami läbiviimiseks on tavaliselt arsti poolt valitud, kuid patsiendil on õigus valida. Kui teil tuli teha PCR-test, rääkige sellest meile kommentaarides. Kui artikkel on teile kasulik, jagage seda sotsiaalsetes võrgustikes - võib-olla see aitab sõpradel.

Mis on tuberkuloosi PCR ja kuidas teha test?

Tuberkuloosi PCR on ette nähtud, kui diagnoosi ei ole võimalik teha või kui teisi uuringuid ei ole võimalik teha. Analüüs võimaldab tuvastada Kochi võlukepi esimesel etapil ja alustada ravi õigeaegselt.

Tuberkuloosi PCR kirjeldus

PCR-diagnostika näidud

Tuberkuloosi PCR tüübid

Analüüsi ettevalmistamine

Kuidas on tuberkuloosi PCR

Uuringu tulemuste tõlgendamine

Tuberkuloosi PCR-i eripärad lastel

Kui palju maksab tuberkuloosi PCR?

Kommentaarid ja ülevaated

Tuberkuloosi PCR kirjeldus

Tuberkuloosi PCR (polümeraasi ahelreaktsioon) on täpne analüüs, mis suudab tuvastada mõne tunni pärast Kochi tõugu. Diagnostika põhineb geenitehnoloogia meetoditel. Arstid eraldavad DNA raku, kasutades patogeenide tüübi määramiseks geenimolekulaarseid teste.

Meetodi eelised

  • võimaldab tuvastada patogeeni varases staadiumis ilma nähtavate sümptomite ilminguta;
  • diagnostikal ei ole vastunäidustusi ja see on lastele lubatud;
  • uuringuid saab teha minimaalse materjali koguse võtmiseks.
  • biomaterjalide uurimise universaalsus;
  • Uuring on efektiivne haiguse kordumise kindlakstegemisel.

Meetodi puudused

Lisaks eelistele on PCR-uuringutel ka puudused.

Peamised neist on:

  1. Uuring ei ole kõikjal, kus saate edasi minna. Kuna sellise diagnoosi seadmed on kallid, paigaldatakse see tasulistesse laboritesse.
  2. Tuberkuloosi PCR võib anda positiivse vastuse, kui ta tuvastab surnud mükobaktereid, näiteks pärast ravi.
  3. Patogeenide mutatsioonid vähendavad oluliselt PCR meetodi efektiivsust, kuna DNA ahelad ei suuda järjestikku sünteesida.
  4. Biomaterjali hoolikas valimine analüüsiks.

PCR-diagnostika näidud

Saada küsitlusele järgmiste tähiste kohta:

  1. Kui tuberkuloosiga patsiendil oli vähemalt üks kontakt ja haigust on raske kindlaks teha standardsete testidega.
  2. On olukordi, kus isikut ei ole võimalik rentida röntgenkiirte või muude uuringute jaoks. Sellistel juhtudel on röga väljastamine palju lihtsam.
  3. Analüüs määratakse eelseisva operatsiooni eelõhtul, kui on vaja kindlaks teha, kas isik on haige või mitte.
  4. Kui patsiendil on Mantoux'i reaktsiooni kahtlane tulemus.
  5. Määrata rasedatele naistele ja lastele, et vältida röntgenkiirte kokkupuudet.

Tuberkuloosi PCR tüübid

Tuberkuloosi skriinimiseks mõeldud biomaterjali valik tuleks määrata individuaalselt.

Tuberkuloosi PCR-i diagnoosimiseks võib teha teste:

Vereanalüüs

Tuberkuloosi vereanalüüsi tunnused:

  1. Teostatakse juhtudel, kui muud diagnostikad ei ole sobivad või vastunäidustatud. Näiteks õige diagnoosi tegemiseks peate võtma rohkem kui ühe röntgenkuva. Liigne kokkupuude ei ole kehale ohutu, seega on patsiendilt verd palju lihtsam võtta.
  2. Samuti võib arst anda verele suunda, kui nad saavad pärast fluorograafiat vastuolulisi tulemusi.

Sülje analüüs

  1. Sülje analüüs on vähem populaarne ja informatiivne kui muud uuringud, sest tuberkuloos ei mõjuta süljenäärmeid. Seetõttu on tulemus enamikul juhtudel negatiivne.
  2. Meetodi eesmärk on tuvastada kopsu- ja ekstrapulmonaarsed vormid.
  3. Kui proovi värv ei muutu reaktiivi toimel, tähendab see, et patogeene ei esine. Kui aga tekib haiguse kahtlus, viiakse läbi täiendav analüüsikompleks.

Röga analüüs

Röga analüüs on kõige informatiivsem tuberkuloosi patogeenide tuvastamiseks. Proovid võetakse tavaliselt mitu korda, piisab kolm korda. See välistab vigade tekkimise halva kvaliteediga materjali hankimisel.

Kui inimene on nakatunud tuberkuloosiga, vabastatakse koos köha väikestes kogustes röga. Haiguse kaugelearenenud staadiumis erituvad lima verised plaastrid.

Kui patsiendil esineb luude või närvisüsteemi tuberkuloosi kahtlust, ei ole soovitatav röga uurimiseks võtta.

Uriini analüüs

Uriinianalüüs on üks viis haiguse ekstrapulmonaalsete vormide avastamiseks: neerutuberkuloos ja kuseteede süsteem.

Haiguse pulmonaalse vormi korral on uriini üldine analüüs praktiliselt mitteametlik, kuna ei täheldatud märkimisväärseid patoloogilisi muutusi.

Video põhjal saate teada, milline arst teeb tuberkuloosi diagnoosi. Filmitud kanalikanali abil. ru.

Analüüsi ettevalmistamine

Vereanalüüsi tegemisel peaks usaldusväärse tulemuse saamiseks järgima PCR-i:

  • Soovitatav on teha analüüs tühja kõhuga;
  • peaks uuringu eelõhtul kõrvale jätma alkoholi;
  • peate lõpetama antibiootikumide võtmise 15–20 päeva enne analüüsi;
  • Soovitatav on suitsetamisest loobuda tund aega enne vere kogumist.

Röga uurimiseks soovitatakse järgida ka mõningaid reegleid:

  • materjali kogutakse hommikul, seetõttu peenestatakse hambaid ja loputatakse suuõõne põhjalikult;
  • kui röga ei liigu hästi, on soovitatav õhtul söögitoru võtta või hingata;
  • Antibiootikumide võtmine tuleb lõpetada 15 päeva enne uuringut.

Uriinianalüüsi usaldusväärse tulemuse saamiseks soovitatakse patsiendil järgida järgmisi reegleid:

  • materjal tuleb koguda hommikul;
  • eelõhtul ei ole soovitatav süüa toitu, mis võib muuta vedeliku värvi (peedi, mustika ja teised);
  • Lõpetage antibiootikumide võtmine 15 päeva enne uuringut.

Kuidas on tuberkuloosi PCR

Materjali sissevõtu omadused:

  1. Hommikul võetakse patsiendilt vereanalüüs laboris veenist.
  2. Röga manustamiseks limaskestale on vajalik tingimata kõri, eelistatavalt ilma suure sülje koguseta. Tema patsient peab sülitama spetsiaalsesse steriilsesse anumasse, seejärel andma uuringu üle.
  3. Arstid haaravad põsk limaskestast spetsiaalse tööriistaga.
  4. Uriini renditakse spetsiaalses mahutis. Võtke hommikuse osa keskosa.

Molekulaarne geneetiline reaktsioon PCR abil viiakse läbi spetsiaalse seadme, mida nimetatakse võimendiks. Uurida vajalikke DNA segmente, mis alustavad molekulide sünteesi.

Tehnika koosneb neljast etapist:

  1. Esialgu kogutakse vajalikku biomaterjali uurimiseks (veri, röga ja sülg).
  2. Seejärel kuumutatakse proovi temperatuurini kuni 98 kraadi ja mitte üle kahe minuti. Seega hävitatakse DNA geneetika esmane vorm ja moodustatakse kaks ahelat.
  3. Järgnevalt ilmneb temperatuuri lõõmutamine või alandamine, mille tõttu seondub praimer DNA ahelaga.
  4. Viimast etappi nimetatakse pikenduseks. See on molekulide süntees, mis viib lõpptulemuseni.

Viiruste DNA teatud arvu koopiate saamiseks tuleb teil kulutada 25-30 sellist tsüklit. Haiguse põhjustajad määravad nad.

PCR-i diagnostika info sisu ja usaldusväärsus on 100%.

Uuringu tulemuste tõlgendamine

Analüüsi tootmise aeg on umbes 5–6 tundi.

Diagnostika PCR meetodil annab tulemuste kaks varianti:

  1. Avastatud. Uuritud materjalis tuvastati tuberkuloosse aine DNA. Nakkuse tõenäosus on 97%. Sellised patsiendid saadetakse kiiresti tuberkuloosiarsti juurde, kus toimub ravi.
  2. Ei leitud. Negatiivne vastus näitab haigustekitaja puudumist.

Kui tulemus on positiivne, teeb arst üksikasjaliku dekodeerimise, mis määrab haiguse etapi ja fookuse.

Fotogalerii

Tuberkuloosi PCR-i eripärad lastel

PCR määratakse juhul, kui Mantoux'i testi tulemus on ebakindel või nakkuse kahtlus. Menetluse tagamine on lastele ohutu.

Tuberkuloosi PCR-diagnoos lastel ja täiskasvanutel: näidustused

Maailma Tervishoiuorganisatsioon tunnistas 20 aastat tagasi, et tuberkuloosi leviku määr oli kontrolli all ja jõudis epideemia ulatuseni. Sellest ajast peale ei ole olukord paranenud. Igal aastal diagnoositakse rohkem kui miljon haigusjuhtu, millest peaaegu veerand on surmaga lõppenud. Viimase kümne aasta jooksul on laste esinemissagedus suurenenud, enamik haiguse vorme ei sobi antibiootikumide standardravi jaoks.

Tänapäeval on üks meditsiinilistest globaalsetest ülesannetest selliste diagnostiliste meetodite väljatöötamine, mis võimaldavad tuvastada patoloogiat enne väljendunud kliiniliste sümptomite ilmnemist. Üks neist on tuberkuloosi polümeraasi ahelreaktsioon (PCR), mis aitab tuvastada Kochi haigust põhjustavaid pulgad veres, röga ja muudes bioloogilistes vedelikes.

Tuberkuloosi diagnoos

Sõelumistestide eesmärk on avastada patsiente, tuberkuloosi kandjaid ja ennetada nakkuse levikut ühiskonnas. Alla 14-aastastele lastele kasutatakse massiivselt Mantoux'i testi. See on immunoloogiline test, milles tuberkuliini annust süstitakse subkutaanselt - mitut tüüpi mükobakterite geneetilise materjali kompleksne segu. Spetsiaalse reaktsiooni ilmnemine näitab aktiivselt esinevat nakkuslikku protsessi.

Ennetuslikuks uurimiseks täiskasvanutel, kasutades fluorograafiat või röntgenikiirgust. Need meetodid aitavad visualiseerida kopsukoe patoloogilisi kahjustusi. Siiski tekitab see raskusi tuberkuloosi eristamisel teisest orgaanilisest patoloogiast (pahaloomulised ja healoomulised kasvajad, põletikulised protsessid, parasiitide sissetungid, professionaalne kopsukahjustus).

Patoloogilise fookuse struktuuri ja suuruse selgitamiseks võib vaja minna täiendavaid instrumentaalseid uuringuid:

  • suunatud radiograafia;
  • kompuutertomograafia;
  • magnetresonantstomograafia.

Tuberkuloosi diagnoosimise meetodid

Kahtlaste tulemuste ja piisava ravi määramiseks on vaja täpsemaid diagnostilisi meetodeid, mis võimaldavad patogeeni isoleerida. Tuberkuloosi pulmonaarsete vormide kinnitamiseks kasutatakse pika aja mikroskoopilist ja bakterioloogilist uurimist.

Viimastel aastatel on mitmesuguste elundite ja süsteemide - neerude, luude, soolte, naha - esinemissagedus muutunud sagedasemaks. Tuberkuloosi nende vormide tuvastamiseks võib kasutada ultraheliuuringuid, uriini ja väljaheite kultuuri, endoskoopilisi uuringuid.

Tuberkuloosi PCR-i diagnostika aitab kinnitada Kochi pulgade olemasolu veres, samuti selle tundlikkust teatud ravimite suhtes. See on väga tõhus meetod, mis põhineb bakteriaalse geneetilise materjali avastamisel mitmesugustes bioloogilistes vedelikes.

Spetsiifilisus ja tähised

Polümeraasi ahelreaktsioon on väga tundlik mikrobioloogiline diagnostiline meetod, mis põhineb geenitehnoloogia põhimõtetel. Patogeeni olemasolu kinnitamiseks bioloogilises materjalis piisab selle jaoks unikaalse nukleiinhappe fragmendi tuvastamisest. Tuberkuloosi PCR võib tuvastada vere, röga, uriini baktereid.

Hetkel on välja töötatud mitu analüüsimeetodit. Kõige populaarsem neist on järgmised:

  • Reaalaja PCR;
  • mikrofluidiline tehnoloogia;
  • sekveneerimine ja püroseerumine.

Reaalaja PCR

Laborid kasutavad kõige sagedamini reaalajas polümeraasi ahelreaktsiooni, kuna see vähendab valepositiivsete tulemuste arvu ja analüüsiprotsess ise võtab lühikese aja.

Arvestades haiguse peidetud vormide suurt arvu ja standardsete diagnostikameetodite ebaefektiivsust, kasutatakse üha enam PCR-i. Selle analüüsi eesmärk on näidatud aadressil:

  • röntgenkiirte kahtlaste alade kindlakstegemine;
  • kahtlaste tuberkuliinitestide tulemused;
  • tõsise seisundiga inimeste röga mikroskoopilise ja bakterioloogilise analüüsi teostamise võimatus;
  • kirurgiliste sekkumiste läbiviimine, kui on vaja kiiresti tagada nakkuse puudumine;
  • fluorograafia, röntgenkiirte või kompuutertomograafia kasutamise lubamatus (nt rasedatel ja rinnaga toitvatel lastel, kiirgusdoosi ületamise korral);
  • kahtlustatakse ekstrapulmonaalset tuberkuloosi (on soovitatav kasutada mitte ainult verd, vaid ka limaskesta).

Tuberkuloosi PCR-diagnostika on tõestanud end laste uurimisel täiendava ekspositsiooni ja kiirete tulemuste puudumise tõttu.

Ettevalmistus ja analüüs

Eriline preparaat vere PCR-i jaoks ei ole vajalik. Vereproovide tüsistuste vältimiseks ja kvaliteetse materjali saamiseks tuleb järgida järgmisi üldreegleid:

  • analüüs tuleb teha hommikul mitte varem kui 2 tundi pärast ärkamist;
  • See peaks piirama rasvaste ja praetud toiduainete tarbimist päev enne vereproovide võtmist;
  • hoiduda 8-9 tunni jooksul söömisest, teest ja kohvist, on lubatud juua puhast vett;
  • Mitte suitsetada vähemalt 3-4 tundi.

Püsivate ravimite (hormoonid, antikoagulandid, põletikuvastased ravimid, antibiootikumid, vere vedeldid) puhul peate sellest teavitama laboratoorset assistenti.

Röga kohaletoimetamisel peate hambad hästi harjatama ja suu mitu korda loputama. Koguge materjal steriilsesse anumasse. Paremate tulemuste saamiseks võib õhtul võtta röga- või mukolüütilist ainet.

Diagnoos ise koosneb mitmest etapist.

    Aia materjal. Seda saab teha laboris ja eemalt. Mõned materjalitüübid, mida patsient ise kogub (uriin, flegma).

Nukleiinhapete struktuuri hävitamine (DNA ja RNA molekulide denatureerimine). Selleks kuumutatakse katsematerjali 98 kraadi temperatuurini ja hoitakse mitu minutit. Selle tulemusena kahekordse heeliksi lahti kerkib, moodustuvad üheahelalised molekulid.

  • Hõõrdumine Pärast praimeri lisamist (lühike nukleiinhappe osa) langeb temperatuur mitu kraadi, aktiveerub polümeraas.
  • Tuvastus. Temperatuur saavutatakse optimaalsele tasemele, ensüümi aktiivsus jõuab maksimaalse tasemeni ja teine ​​ahel viiakse lõpule vastavalt Chargaffi komplementaarsuse reeglile.
  • Uuringu lõpuleviimiseks on vaja sünteesida vajalik arv DNA molekule - umbes 50 tsükli ülaltoodud reaktsiooni. See võtab aega umbes 2-3 tundi. Reaktsiooni positiivne tulemus ei näita alati haiguse aktiivset etappi, vaid näitab mikroorganismi olemasolu organismis.

    Meetodi eelised ja puudused

    Võrreldes teiste mikrobioloogiliste meetoditega, ei võta PCR-iga PCR-iga PCR-iga PCR-iga PCR-i abil pikka aega aega, tulemust on võimalik saada testimise päeval.

    Teiseks eeliseks on analüüsi kõrge spetsiifilisus, mis võimaldab tuvastada patogeeni olemasolu 90-95% täpsusega peaaegu igas biomaterjalis (veri, uriin, väljaheited, tserebrospinaalvedelik, röga, bronhide lopetus).

    Meetodi puhul on siiski mitmeid puudusi:

    • üsna kõrge valepositiivsete tulemuste protsent (kuni 15%), mis on seotud elusate mikroorganismide avastamisega;
    • mõnel juhul võite haiguse tõrjumise vahele jätta, sest Mycobacterium tuberculosis'e suhtes rakendatakse sageli mutatsioone ja nende geneetilisi materjale;
    • immuunpuudulikkusega inimeste uurimise madal efektiivsus;
    • kõrgete hindadega, vajadus kalli varustuse ja reaktiivide järele.

    Mida saab asendada?

    Arvestades tuberkuloosi nakkuse erinevaid vorme, täpsemat diagnoosi ja ravi valikut, on vaja kombineerida mitmeid diagnostilisi uuringuid:

      Laste kohustuslik analüüs on Mantoux'i test. Kui tuberkuliini (mükobakterite geneetiline materjal) sissetoomine ilmneb selgelt, võib eeldada, et see nakatub tuberkuliiniga.

    Patoloogilise fookuse visualiseerimiseks võib kasutada röntgenmeetodeid. Ekstrapulmonaalse tuberkuloosi diagnoosimisel kasutatakse samaaegse biopsiaga endoskoopilisi meetodeid:

    • bronhoskoopia aitab tuvastada kõri, hingetoru, bronhide kahjustusi;
    • kolonoskoopia - sooled;
    • tsüsteetroskoopia - kuseteede organid;
    • hüsteroskoopia - naiste suguelundid. Need meetodid ei ole spetsiifilised, täpseks diagnoosimiseks tuleb tuvastada patogeen.

    Üldised kliinilised testid aitavad keha seisundit täpsemalt kindlaks määrata. Vajalik on täielik vereloome leukotsüütide valemiga.

    Vähendatud lümfotsüütide taseme neutrofiilide arvu suurenemine ja erütrotsüütide sadestumiskiiruse (ESR) suurenemine näitab bakteriaalse etioloogia aktiivset põletikulist protsessi. Vältida kuseteede organite kahjustusi, kasutades üldist uriinianalüüsi ja steriilsuse kultuuri.

    PCR on praegu saadaval enamikes erasektorites. See nõuab mitte ainult kõrgelt kvalifitseeritud spetsialiste, vaid ka kalleid seadmeid, suurt hulka reaktiive. Seetõttu on selle meetodi kasutamine piiratud, hoolimata selle suurest täpsusest ja spetsiifilisusest.

    Tuberkuloosi polümeraasi ahelreaktsioon (PCR)

    Tuberkuloos on üks kõige ohtlikumaid haigusi, millest inimkond on kannatanud sadu aastaid. Kuigi teadlased suutsid tuvastada haigustekitajat ja selle kõrvaldamiseks antibiootikume, ei ole ravi alati edukas. Peamine põhjus on haiguse pikk varjatud või varjatud vorm, mis võib kesta mitu aastat. Hiline diagnoosimine vähendab oluliselt patsiendi taastumisvõimalusi ja täielikku elu.

    Mis on PCR?

    Mükobakterite tuberkuloosi avastamiseks organismis üle saja aasta on Mantoux'i testi edukalt kasutatud. Teised meetodid on end hästi tõestanud: bakterioloogiline kultuur kunstlikes keskkondades, mustri mikroskoopia, ELISA. Kuid suur hulk tüsistusi ja valepositiivseid tulemusi, samuti mõnede meetodite kestus vajasid uute tehnoloogiate juurutamist diagnostikasse. Suur läbimurre mikrobioloogia valdkonnas oli tuberkuloosi PCR-analüüsi teke. Juba mitu aastakümmet on see olnud tõhus ja seda kasutatakse laialdaselt tuberkuloosi eri vormide diferentsiaaldiagnoosimiseks.

    Tuberkuloosi või polümeraasi ahelreaktsiooni PCR analüüs on meetod bakterite või nende fragmentide DNA tuvastamiseks, mis põhineb nukleiinhappemolekulide suurenemisel ensüümi DNA polümeraasi toimel. Positiivse tulemuse saamiseks piisab ainult ühest patogeensest DNA molekulist, seetõttu peetakse seda meetodit väga tundlikuks. OCP diagnoos tuberkuloosi korral on efektiivsem kui mükobakterite külvamine kunstlikus keskkonnas, kuna erinevalt kultiveerimismeetodist võimaldab see eristada looduslikke ja vaktsiini tüvesid, mis on vaktsineeritud BCG-ga. See väldib valepositiivseid tulemusi ja muudab diagnoosi täpsemaks.

    PCRi eelised

    Tuberkuloosi PCR-diagnostika võimaldab tuvastada Koch bacillust organismi mis tahes bioloogilises keskkonnas, määrates nende kvantitatiivse kompositsiooni isegi haiguse algstaadiumis, kui mükobakterid on talveunest. Haiguse diagnoosimine latentses faasis võimaldab aegsasti alustada profülaktilist ravi, et vältida kopsupõletike fookuste teket ja komplikatsioonide ilmnemist teistes elundites ja süsteemides. Lisaks on tuberkuloosi PCR-testil mitmeid eeliseid:

    • kõrge spetsiifilisus - 90-100%;
    • suur kiirus - 4 tundi kuni 2 päeva;
    • kõrge tundlikkus, eriti immuunpuudulikkuse korral;
    • diferentsiaaldiagnoos.

    Meetodi peamiseks eeliseks on see, et lastel tuberkuloosi CRC-diagnoos võimaldab eristada haiguse levinud vormi piiratud fookusest, isegi teiste testide negatiivsete tulemustega. Diferentsiaalne testimine võimaldab teil valida õige ravirežiimi ja suurendada ravi efektiivsust.

    Analüüsi kõrge spetsiifilisus saavutatakse ristreaktsioonide kõrvaldamisega teiste nukleiinhappemolekulidega ja kõrge tundlikkus võimaldab tuvastada mükobaktereid isegi kogutud materjali väikestes kogustes. Tuberkuloosi röga PCR-meetodil on suurim usaldusväärsus, selle spetsiifilisus ulatub 100% -ni võrreldes teiste bioloogiliste materjalidega.

    PCR-i erimehhanism pakub piisavalt võimalusi Koch-pulgade avastamiseks immuunpuudulikkusega patsientidel. Analüüsimeetodi kohaselt tuvastab reaktsioon antigeene, seega ei ole oluline, kas organism toodab patogeeni antikehi või mitte. Seega on võimalik diagnoosida haiguse ekstrapulmonaalseid vorme ja kaugelearenenud juhtumeid patsientidel, kellel on immuunsüsteemi vigu, mis on teiste meetodite abil võimatu.

    Meetodi puudused

    Vaatamata analüüsi paljudele eelistele ja suurele tundlikkusele võib tuberkuloosi PCR anda vale negatiivse tulemuse. Kuna diagnoosimiseks võetakse väga väike kogus biomaterjali, siis asjaolu, et patogeeni "peidab" rakus või põletikulises fookuses, ei ole välistatud ja seda ei vabastata väljapoole.

    Selle meetodi tundlikkus lastel on 25-80%. Näiteks randomiseeritud uuringus kliiniliselt tõestatud diagnoosiga patsientide grupis andis PCR-i vereanalüüs tuberkuloosi suhtes positiivse tulemuse ainult 50% patsientidest. Sellega seoses ei ole lapse patogeensete mükobakterite testimisel võimalik asendada üht diagnostikameetodit teisega. Infektsiooni puudumise täielikuks kontrollimiseks on vaja läbi viia põhjalik uuring mitmel viisil korraga.

    Kogumisprotsess

    PCR-diagnostika usaldusväärsuse peamiseks tingimuseks on vastavus bioloogiliste vedelike kogumise eeskirjadele. Saastunud või valesti kogutud materjal võib põhjustada ebaõigeid tulemusi. Kõige tavalisemad on röga, vere ja uriini analüüs, kuid sügavama diferentsiaaldiagnoosi jaoks on võimalik võtta proove mao, sünoviaalvedeliku, tserebrospinaalvedeliku, bronhide loputusvedeliku, sperma, eesnäärme sekretsiooni kohta.

    Uriini PCR tuberkuloosi suhtes võetakse hommikul pärast välist hügieeni, urineerides steriilsesse anumasse. Protseduuri ajal on oluline mitte puudutada konteineri siseseinu, et vältida kolmandate isikute mikroorganismide sisenemist. Naised, kes elavad regulaarse seksuaalelu, peaksid kindlasti panema tampooni tupe, et vältida kolmanda osapoole heakskiitu.

    Vereproov võetakse hommikul tühja kõhuga ja tuberkuloosi röga PCR-i saab teha igal ajal päeval, kohustusliku suuhügieeniga. See on vajalik toidu jääkide eemaldamiseks, mis võivad konteinerisse siseneda. Röga väljavõtmisel on oluline hoida ära sülje ja lima sissetung nasofarünnist mahutisse, mis võib moonutada analüüsiandmeid.

    Mao sisu uurimine toimub haiglas varahommikul, samal ajal kui öösel alla neelatud röga on maos. Mükobakterite tuberkuloosi tuvastamiseks selle meetodiga teevad nad kolmekordse külvamise, mis tõenäoliselt võimaldab Kochi võlukeha isoleerida.

    Tulemuste dekodeerimine

    PCR kvalitatiivne analüüs annab 2 tüüpi tulemusi "avastatud" või "ei tuvastatud". Need tähendavad vastavalt positiivset ja negatiivset otsust. Vastus "avastatud" tähendab, et nakkusetekitaja DNA on testproovis ja 97% tõenäosusega on organism nakatunud tuberkuloosiga. Negatiivne tulemus näitab, et Kochil ei ole bioloogilise materjali proovis DNA-d, ja annab 97% tõenäosuse, et kehal ei ole palju mükobaktereid ja 60%, et inimene ei ole nakatunud.

    Tuberkuloosi diagnoosimise suurim spetsiifilisus on vereanalüüs ja röga. Positiivse tulemusega viitavad nad keha nakatumisele, mis nõuab kiireloomulisi ravimeetmeid. Teiste biomaterjalide uuringud võivad viidata mitte haiguse kulgemisele, vaid ainult võõraste bakterite esinemisele. See juhtub siis, kui inimene on haiguse kandja, kuid ei levita nakkust keskkonda ega nakka terveid inimesi.

    Kvantitatiivne PCR analüüs viiakse läbi harvemini ja raviarst tegeleb selle tulemuste dekodeerimisega. Uuringu indikaatoreid kasutatakse haiguse aktiivsuse ja keha kahjustamise ulatuse määramiseks. Saadud andmete põhjal võib spetsialist määrata ravi efektiivsuse ja vajadusel kohandada raviskeemi.

    Tuberkuloos on alati olnud ja on üks inimkonna tervisele kõige tõsisemaid probleeme. Kaasaegsed diagnostikameetodid suudavad haigust varajases staadiumis avastada, et alustada ravi õigeaegselt. Tuberkuliiniproov, mustri mikroskoopia, bakterite kultuur kunstlikel toitainetel on end tõestanud tuberkuloosi laboratoorse diagnoosimise valdkonnas. Kuid pikad ootused tulemustele ja valepositiivsete lugemite suurenenud sagedus muutsid need vananenuks ja tõstsid esile rohkem arenenud tehnoloogiaid. PCR analüüs on väga spetsiifiline ja väga tõhus meetod tuberkuloosi diagnoosimiseks. Tema tulemused on kõige usaldusväärsemad kõigi Koch-pulgade avastamise laboratoorsete meetodite seas. See võimaldab mitte ainult teha lõplikku otsust, vaid ka vajalikku diferentsiaaldiagnoosi.

    Polümeraasi ahelreaktsioon tuberkuloosi suhtes

    Tuberkuloosi PCR-analüüs võimaldab teil tuvastada haiguse kõikides arenguetappides minimaalse arvu mükobakterite või isegi siis, kui patogeeni DNA-s on inimkehas fragmente.

    Mis on PCR?

    PCR ilmus suhteliselt hiljuti. 1983. aastal lõi selle meetodi Ameerika mikrobioloog Carey Mullis, kellele ta sai Nobeli preemia. PCR aluseks on DNA teatud piirkonna korduv kahekordistamine ensüümide abil in vitro. Selle tulemusena on patogeeni DNA moodne, et visualiseerida isegi oma kohalolekus minimaalsetes kogustes (olemasolu jäljed). See on spetsiifilisuse kuldstandard.

    Tuberkuloosi PCR (polümeeri ahela protsess) on diagnostiline protseduur nakkuse avastamiseks, kasutades geenitehnoloogiat. Seda uurimismeetodit kasutatakse mikrobioloogilistes, viroloogilistes ja immunoloogilistes meditsiinilaborites diagnoosimisjuhtumite osas kahtlaste ja praktiliselt lootusteta.

    Mida on vaja analüüsiks?

    Analüüs nõuab 3 komponenti:

    • DNA proov.
    • Nukleotiidühendid.
    • Polümeraasi ensüüm.

    Analüüs esitatakse laborile vastavalt raviarsti ettekirjutusele.

    Mis on meetodi alus?

    Uuringu alguses ekstraheeritakse biofluidist mikroobne DNA segment.

    PCR määrab patogeeni tüübi 2–3 tundi pärast katset. Siiski ei pea seda bioloogilisest materjalist eraldama või laboris pikema aja jooksul kasvama. Peaasi on see, et proov sisaldas nakatunud DNAd. Tuberkuloosi analüüsi käigus luuakse ribonukleiinhappe infektsiooni kunstlik süntees in vitro. Tänu kiirele reageerimisele paari tunni pärast saate usaldusväärse tulemuse.

    Diagnoosi etapid

    Tuberkuloosi PCR on lihtne diagnostiline meetod, mis võimaldab teil lühikese aja jooksul vastata. Tbc määramiseks võetakse nakatunud inimese (veri, röga, bioloogiline vedelik) bioloogiline materjal.

    Diagnoosimine toimub kolmes põhietapis:

    • Pärast laboratoorse proovi võtmist hävitatakse DNA esmane vorm. Temperatuuril 980 kraadi eraldatakse 1,5 ahelat 1,5 minuti jooksul.
    • Järgmises etapis tehakse anniilimine, õhutemperatuuri vähendatakse paar jaotust, DNA on ühendatud praimeriga.
    • Uuringu viimast etappi nimetatakse pikenduseks. See on molekulide biosüntees.

    Soovitud DNA tuvastamiseks nakkuse osakestega saab diagnoosida 20-25 korda.

    Kas tuberkuloosi suhtes on vaja teha PCR?

    Tuberkuloosi PCR-analüüs tehakse alati, kui seda vajatakse, see on kaasatud tuberkuloosi patsiendi uurimise kvaliteedistandardisse. Selle läbiviimiseks on vaja ainult arstilt suunamist. Kõige sagedamini kasutatakse tuberkuloosi määramiseks polükliinikates teisi diagnostilisi meetodeid.

    Nende hulka kuuluvad:

    • Anamneesi küsitlemine ja kogumine.
    • Meditsiiniline läbivaatus.
    • Mantoux tuberkuliiniproov.
    • Röntgen- või fluorograafia.
    • Ultraheli.
    • Röga proovi mikroskoopiline diagnoos.

    Vaatamata suurele arvule diagnostikavahenditele kasvab nakatunute arv igal aastal. Lisaks on patoloogia omandanud mõningaid omadusi: protsessi tõsidust, surmavate tulemuste suurenemist ja patogeeni immuunsust ravimitele.

    Arstid ei soovita loobuda iga-aastasest kontrollist ja vaktsineerimisest, sest see suurendab nakatumise ohtu. PCR-analüüsil on palju eeliseid, seetõttu peetakse seda kõige täpsemaks ja informatiivsemaks kõigi instrumentaalsete meetodite kohta, mida kasutatakse tbc tuvastamiseks ja mida kasutatakse laialdaselt kaasaegsetes kliinikutes.

    Milline on meetodi väärtus?

    Polümeeri ahela protsessi kasutatakse sageli koos täiendavate meetoditega tuberkuloosi nakkuse avastamiseks. Meetodi väärtus on järgmine:

    • Lühike hoidmisaeg. Juba pärast 2-3 tundi pärast vere loovutamist on võimalik tuvastada nakkuse esinemine bioloogilises materjalis. See on hädavajalik juhtudel, kui on tegemist elu ja surma küsimusega ning teil on vaja kindlaks teha kirurgilise sekkumise täpne diagnoos.
    • Mõnedel diagnostilistel meetoditel on oma vastunäidustused ja nad ei näita alati täielikku pilti diagnoosist. PCR abil avastatakse patogeen kohe, ja protseduuri on võimalik teha igas vanuses inimestele.
    • Proovina võite võtta nakatunud bioloogilisi materjale. Haiguse kopsuvormide määramiseks võetakse uriin või sülg. Vereproov aitab tuvastada kõiki patoloogilisi vorme. Tuberkuloosse meningiidi määramiseks on vajalik seljaaju vedelik.
    • Ohutusmeetod. Uurimiseks on vaja ainult patsiendi bioloogilist materjali. Seetõttu on see täiesti ohutu ja kahjutu protseduur nii lastele kui ka täiskasvanutele, erinevalt fluorograafiast, mis toimub alates 18-aastastest ja Mantoux'ist, mis põhjustab kehas negatiivseid reaktsioone.
    • Väga tundlik test. See võimaldab patoloogiat tuvastada isegi arengu varases staadiumis, kui viirus ei ole veel kõik keha rakud tabanud.
    • Efektiivne meetod patoloogia kordumise diagnoosimiseks.
    • Innovatiivne viis Kochi võlukeppide tuvastamiseks selle arengu esimestest päevadest. See võimaldab teil kiiresti alustada õiget ravi ja päästa inimene surmast. Arengu varases staadiumis saab patoloogiat täielikult ravida ilma tüsistusteta.

    Sellel diagnoosimeetodil on palju eeliseid ja seda kasutatakse aktiivselt erinevates meditsiiniasutustes. Vaatamata oma eelistele on PCR-il ka negatiivsed tunnused.

    Millised on puudused?

    Polümeeri ahela protsessi puudused on järgmised:

    • Menetluse kõrge hind.
    • Meetod ei sobi neile, kes on juba läbinud tbc-ravi, sest surnud nakkusrakud võivad anda valepositiivse tulemuse.
    • Kui DNA rakkude mutatsioon võib olla vale tulemus.
    • Spetsialist peab võtma nakkuse tüübi ja selle asukoha kindlaksmääramiseks vajaliku bioloogilise materjali õigesti.
    • Ei ole alati lubatud kopsuhaigusega patsientidele.

    Kes näitab analüüsi?

    Enamasti on selline analüüs määratud:

      • Kui Mantoux'i tulemused andsid kahtlaseid andmeid, võetakse verd tuberkuloosi veenist.
      • Patsiendil oli kokkupuude nakatunud isikuga, kuid tervisekontroll ei aidanud kindlaks määrata õige diagnoosi.
    • Hädaolukorra ajal, mil te peate teadma võimalikult lühikese aja jooksul, kas patsient on nakatunud.
    • Raseduse ajal, kui teised diagnostilised meetodid ei anna täpset tulemust lootele kahjustamata.

    Pärast kõigi tbc diagnoosimise eeliste ja puuduste uurimist võime järeldada, et õige diagnoosi tegemiseks on kõige parem korraga korraga kasutada mitmeid diagnostilisi meetodeid. See aitab tagada, et kehas on nakkus ja millises etapis see on. Olles diagnoosi õigesti määratlenud, on võimalik alustada kiiret konservatiivset ravi ja päästa inimene surmast.

    Tuberkuloosi PCR-diagnoos

    Tuberkuloos on spetsiifiline nakkus, selle fookus võib olla inimkudedes juba aastaid ja seejärel mitme kuu jooksul. See on krooniline haigus, mille optimaalne ravirežiim on raske valida. Selle üheks põhjuseks on hiline diagnoosimine, kui mükobakterid on inimorganismis juba paljude ravimitega kohanenud.

    Millised on kaasaegsed diagnoosimeetodid? PCR diagnostika - mis see on? Kuidas see uurimus tehakse? Millistel juhtudel on selle meetodiga diagnoositud tuberkuloos ja milline on selle olemus?

    Mis on PCR diagnostika

    See on üks kaasaegsemaid meetodeid mitte ainult haiguste, vaid ka bioloogilise materjali avastamiseks. PCR diagnostika leiutati suhteliselt hiljuti. Umbes 30 aastat tagasi 1983. aastal pakkus Ameerika biokeemik Carey Banks Mullis välja ühe lühikese segmendi mikroorganismide bioloogilise materjali kompleksse taastamiskava. Tänu avastusele pälvis teadlane kõrgeima auhinna - Nobeli preemia.

    Mis see on - nakkuste PCR-diagnoos? Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on viirushaiguste avastamise diagnoos, mis põhineb geenitehnoloogia meetoditel. Seda kasutatakse laialdaselt meditsiinilise mikrobioloogia, immunoloogia ja viroloogia valdkonnas. Meetod on universaalne ja aitab teha diagnoosi väikese koguse materjaliga. Infektsiooni võib sõna otseses mõttes tuvastada esimestel nakatumise tundidel kaua enne haiguse esimeste sümptomite ilmnemist.

    Meetod seisneb haige inimeselt materjali saamises mitte patogeenis, vaid genoomi fragmentides (DNA osakesed), selle biosünteesis ja sellele järgneva määramisega, milline mikroorganismide klass on saadud geneetilise materjali molekulide geneetiliste meetodite abil.

    Hoolimata asjaolust, et see on keeruline protsess, kulub palju vähem aega kui paljud bioloogilised meetodid nakkusetekitajate avastamiseks. Mõne tunni jooksul võib mikroorganismi PCR abil tuvastada. Selleks ei ole vaja seda keskkonnast eraldada (veri, tserebrospinaalvedelik, röga) ja kasvatada seda pikka aega kunstlikel toitainetel. Piisab, et uuritava materjali juures on nakkusetekitaja DNA ahela väike fragment.

    Reaktsiooni aluseks on kunstlikes tingimustes (in vitro) võimalus nakkusetekitaja nukleiinhappemolekulide sünteesi loomiseks.

    Mida on vaja PCRi jaoks?

    1. Krundid on DNA segmendid, millest algab biosüntees või loomine.
    2. Nukleotiidid või komplekssed ühendid, mis on DNA või RNA molekuli aluseks.
    3. Polümeraasi ahelreaktsioon on polümeraasi olemasolu korral võimatu, mis on PCR-i kiirendav ensüüm.

    PCR-diagnostika etapid

    Kuidas toimub molekulaarne diagnoos PCR abil? Menetlus on lihtne ja võtab aega, võttes arvesse materjali kogumist.

    1. Enne uuringu alustamist võtavad nad vajaliku bioloogilise materjali - see on bronhide pesuvesi, veri, mao sisu, röga. Bioloogilise materjali tüüp sõltub kahtlustatavatest patogeenidest.
    2. Kahest ahelast koosneva DNA esmase struktuuri denaturatsioon või hävimine. Selle etapi põhieesmärk on eraldada kaks ahelat kõrge temperatuuri mõjul (maksimum on 98 ° C, mis kestab mitte rohkem kui kaks minutit).
    3. PCR järgmises etapis, mida nimetatakse anniilimiseks, vähendatakse temperatuuri mitu kraadi, nii et praimer seondub DNA ahelaga.
    4. Pikenemine, mille jooksul toimub soovitud molekulide süntees otse.

    Selle tulemusena saavad ainult 25–30 sellist tsüklit vajaliku arvu koopiaid mikroorganismi DNA-st, mida on lihtne ära tunda.

    Kas PCR nõuab tuberkuloosi diagnoosi?

    PCR-i ei ole võimalik teostada absoluutselt kõikidel inimestel, kellel on kahtlustatav tuberkuloos, kuna see meetod nõuab kalleid seadmeid. Mitte kõik avalikud kliinikud ei saa seda endale lubada. Lisaks juhtus nii, et tavalised meetodid nakkuse diagnoosimiseks enamikul juhtudel õigustavad ka ennast.

    Nende hulka kuuluvad:

    • patsiendiuuring, ajaloo võtmine;
    • isiku täielik läbivaatus;
    • Mantoux tuberkuliiniproovi kasutades;
    • radiograafia või fluorograafia;
    • vajadusel arvuti diagnostika;
    • mikrobioloogiliste uuringute meetodid: mustri mikroskoopia ja röga bakterioloogiline uurimine.

    Tuberkuloosi PCR viiakse läbi erijuhtudel, kui on raske diagnoosida või muid instrumentaalseid meetodeid ei ole võimalik teostada.

    Vaatamata diagnostiliste meetodite rohkusele kasvab tuberkuloosi esinemissagedus jätkuvalt. Praegu ei ole mitte ainult kasv, vaid ka muud omadused:

    • haigus esineb sageli raskes vormis;
    • surmaga lõppenud juhtude arv suureneb;
    • haiguse diagnoositud vormid on üha resistentsemad tänapäevase keemiaravi suhtes.

    Inimeste vastumeelsus igal aastal läbi viia tavapäraseid arstlikke läbivaatusi, vaktsineerimise tagasilükkamine viib tuberkuloosi levikuni. Sellistes tingimustes on vaja kiireid, informatiivseid ja tõhusaid uurimismeetodeid, mis peaksid olema kättesaadavad lastele ja täiskasvanutele. Kõik ülaltoodud diagnostikameetodid on palju halvemad kui PCR.

    Tuberkuloosi diagnoosimise eelised PCR-iga

    See uuring, kuigi uus, on end hästi tõestanud, eriti vastuolulistel juhtudel, kus on mitmel põhjusel võimatu diagnoosida.

    Tänu PCR-ile on katsematerjalis tuberkuloosi põhjustaja tuvastamine palju lihtsam.

    PCR-i diagnostika eelised on järgmised.

    1. See on kiire analüüs. DNA molekuli väikest fragmenti saab kasutada vaid mõne tunni (umbes viie) tunni jooksul diagnoosimiseks, mida kasutatakse hädaolukordades edukalt, kui näiteks enne operatsiooni on vaja kindlaks teha, kas inimene on haigestunud tuberkuloosiga.
    2. PCR-analüüs on lubatud juhul, kui teised meetodid ei ole kättesaadavad või keelatud (kopsu tuberkuloosi avastamiseks tuleb mõnikord võtta mitu radiograafilist pilti, mis on suur kiirgusdoos).
    3. PCR abil uuritakse mistahes bioloogilist keskkonda patogeeni olemasolu selles. Näiteks võite teha uuringuid tserebrospinaalvedeliku kohta, kui kahtlustatakse tuberkuloosse meningiidi tekkimist.
    4. Laste nakkushaiguste lubatud PCR-diagnoos, sest meetod on ohutu.
    5. Võimaldab tuvastada patogeeni haiguse mis tahes staadiumis.
    6. PCR kõrge tundlikkus võimaldab tuvastada Mycobacterium tuberculosis, isegi kui bioloogilises materjalis on vaid mõned mikroorganismid.
    7. Haiguse kordumise diagnoosimiseks on hea teha.

    Lõppude lõpuks tundub lugenud PCR peaaegu täiuslik diagnostiline meetod, mis peaks tegema kõikidele tuberkuloosi kahtluse. Kuid siin on ka puudusi, neid tuleb arvesse võtta.

    PCRi puudused tuberkuloosi diagnoosimisel

    Meie aja jooksul on selline diagnostika tavalisest harvem. Ja selleks on põhjus.

    1. See on kallis uurimismeetod. Paljudes kliinikutes puuduvad PCR-i seadmed selle kõrge maksumuse tõttu, kuid analüüse saab veel teha tasulistes laborites.
    2. Vahetult pärast töötlemist võivad inimkehas olla surnud mükobakterid või väikeses koguses elamine (tulemus on positiivne PCR-diagnostika ajal), mistõttu meetod ei ole sel ajal usaldusväärne, seda ei ole mõistlik seda teha.
    3. Mükobakterite mutatsioonid põhjustavad ebaefektiivset PCR-i - normaalset DNA ahela järjestust ei ole võimalik sünteesida.
    4. Uuringu jaoks on vaja valida õige keskkond, verd võetakse ainult siis, kui kahtlustatakse nakatumist (sepsis), närvisüsteemi organite tuberkuloosi korral ei ole vaja rögaid võtta. Sellisel juhul ei suuda PCR patogeeni tuvastada ja diagnoos on informatiivne.

    Indikaatorid tuberkuloosi tuvastamiseks PCR analüüsi abil

    Tuberkuloosi PCR-diagnoosimine toimub kõige sagedamini vastuolulistel juhtudel. Millal suunavad arstid selle uuringu?

    1. Kui diagnoosi on raske teha tavapäraste olemasolevate meetodite abil, kuid tuberkuloosiga patsiendil oli kokkupuude.
    2. Juhul, kui isikut ei saa kliinikusse tuberkuloosi rutiinsete katsete tegemiseks üle anda, on teda kergem uurida PCR-i abil, sest testi röga võib toimuda purki ja diagnoos kinnitatakse mõne tunni jooksul.
    3. Kui inimesel on hädaabioperatsioon ja on hädavajalik teada saada, kas ta on haigestunud tuberkuloosiga.
    4. Vajadusel on rasedatel ka PCR-i abil paremini uurida tuberkuloosi, sest meetod on ohutu.
    5. Tasulisel alusel on igaüks, kellel ei ole diagnoositud tuberkuloosi, kinnitatud bakterioloogiliste meetodite ja fluoroskoopia abil. See juhtub siis, kui kopsudes esinev kahjustus ei ole otseses pildis nähtav ning uuringu jaoks röga väljaandmisel ei suutnud inimene järgida materjali õige kogumise soovitusi. Sel juhul on inimene mures kõikide kopsutuberkuloosile iseloomulike sümptomite pärast.
    6. Kui on kahtlusi Mantoux'i testi tulemuste suhtes.
    7. Lastel on soovitatav teha tuberkuloosi PCR-diagnoos. Protseduur on ohutu, ei tekita täiendavat kiirgusega kokkupuutumist ja on efektiivne haiguse diagnoosimiseks raske.

    Tuberkuloosi õigeaegne diagnoosimine on võtmeks nõuetekohaselt määratud ravile ja haiguse leviku vähendamisele. Sageli ei ole tuttavad haiguse tuvastamise meetodid alati tõhusad. Seetõttu on PCR tänapäeval üks kõige usaldusväärsemaid ja ohutumaid viise nakkuse avastamiseks selle arengu varases staadiumis.